Zaburzenie ze spektrum autyzmu (ASD) – zaburzenie neurorozwojowe z problemami w zachowaniach społecznych, komunikacji i dysfunkcją przewodu pokarmowego. Badanie dotyczy interwencji multimodalnych ukierunkowanych na te ścieżki z wykorzystaniem cSVF, przechowywanych MSC, FMT oraz modyfikacji diety. Zbadano rolę autoimmunizacji, problemów na osi mózg–jelito i innych kwestii. (GARM-Autism)

Ten udoskonalony protokół integruje najnowsze dowody dotyczące interwencji multimodalnej – autologicznego cSVF, kriokonserwowanych autologicznych MSC, FMT oraz strukturalnego programu ketogenicznego – w leczeniu ASD u młodzieży i dorosłych.

1. Podsumowanie protokołu

   Tytuł:

   Randomizowane badanie kontrolowane fazy 1-2 oceniające bezpieczeństwo i skuteczność terapii multimodalnej (autologiczny cSVF + kriokonserwowane autologiczne MSC, transplantacja mikrobioty kałowej, reset programu ketogenicznego oraz trening OT/PT) u młodzieży i dorosłych z zaburzeniami ze spektrum autyzmu (ASD – ocena wielopoziomowa)

   Sponsor: Blacktie Główny badacz: Robert W. Alexander, MD, FICS Faza badania: Faza I/II Ośrodki badawcze: 1-3 kliniczne laboratoria badawcze/ośrodki akademickie z doświadczeniem w ASD, przetwarzaniu i stosowaniu komórek macierzystych, a także dostępni konsultanci gastroenterolodzy/PMD dla FMT w lokalizacji pacjenta

   Zgodność:

   Nadzór NIH i IRB Świadoma zgoda wszystkich uczestników

   ________________________________________

2. Tło i uzasadnienie Zaburzenia ze spektrum autyzmu (ASD) to stan neurorozwojowy z podstawowymi deficytami w komunikacji społecznej i zachowaniu, często któremu towarzyszą zaburzenia żołądkowo-jelitowe (GI) i metaboliczne. Rosnące dowody potwierdzają rolę neurozapalenia (w tym składników autoimmunologicznych), zaburzeń osi mózg-jelita oraz dysregulacji metabolicznej w patofizjologii ASD. Interwencje multimodalne ukierunkowane na te szlaki – z użyciem autologicznego cSVF, kriokonserwowanych MSC, FMT i modulacji diety – mogą przynieść synergiczne korzyści młodzieży i dorosłym z ASD.

   ________________________________________

3. Cele i punkty końcowe

   Cel główny:

   ​• Ocena bezpieczeństwa i tolerancji interwencji multimodalnych w porównaniu z obecnym standardowym leczeniem (SOC) w terapii wspomagającej.

   Cele drugorzędne:

   ​• Ocena zmian w podstawowych objawach ASD, funkcji GI, wynikach behawioralnych i społecznych oraz jakości życia.

   Punkty końcowe:

   • Częstość występowania zdarzeń niepożądanych (AE) i poważnych zdarzeń niepożądanych (SAE)
   • Zmiana w zwalidowanych skalach objawów ASD i GI (CARS, VABS-II, GSRS, SRS, ABC)
   • Różnorodność mikrobiomu i zmiany biomarkerów metabolicznych
   • Ocena wydajności i oceny QoL

4. Projekt badania i metodologia

   • Projekt: Wielodyscyplinarny, otwarty, kontrolowany, równoległy (1:1:1), monitorowany pod kątem stosowanych komórek i produktów biologicznych, otwarty, z monitorowaniem diety/OT-PT
   • Wielkość próby: 50 uczestników (wiek 10-90 lat, diagnoza ASD według DSM-5)
   • Randomizacja: Stratyfikowana według wieku, płci i wyjściowych objawów GI oraz socjalizacji
   • Analiza tymczasowa: Analiza daremności przy 50% rekrutacji

5. Populacja badana

   Kryteria włączenia:

   • Wiek 10-90 lat, diagnoza ASD według DSM-5
   • Stabilne leczenie obecnymi lekami (jeśli były stosowane w momencie selekcji)
   • Z współistniejącymi objawami GI lub bez

   Kryteria wykluczenia:

   • Stosowanie antybiotyków/probiotyków w ostatnim czasie
   • Ciężka choroba GI lub niedożywienie
   • Ostatnio przebyta poważna operacja
   • Inne problemy medyczne/chirurgiczne uniemożliwiające leczenie zgodnie z protokołem; w tym ograniczenia spektrum dotyczące tolerancji lub zgodności pacjenta.

6. Protokoły interwencyjne 6.1 Autologiczna komórkowa frakcja zrębowo-naczyniowa (cSVF)

   • Pobranie: Młotkowanie z użyciem małej objętości lipoaspiratu poprzez sterylną mikrokanyle w celu uzyskania małych agregatów tSVF – w znieczuleniu miejscowym lub uzupełniającym w zależności od tolerancji pacjenta.
   • Przetwarzanie: Trawienie enzymatyczne dla cSVF i izolacja/koncentracja komórek heterogennych grup komórkowych w cSVF (przy użyciu kolagenazy, wirowania i ewentualnej charakterystyki komórek nieoznaczonych (CD34+, CD90+, CD105+).
   • Dawkowanie: ≥ 10 x 10^6 – 5 × 10^7 komórek podawanych w standardowym wlewie dożylnym z solą fizjologiczną
   • Podanie: Dożylnie (IV) z filtracją 150u w linii filtracyjnej
   • Zastosowanie światła LED czerwonego na cSVF podczas podawania
   • Standardowy protokół American Cell Technology (ACT) pobierania, testowania i wysyłki nocą w dniu pobrania dla protokołu kriokonserwacji w celu przechowywania autologicznych mezenchymalnych komórek macierzystych (MSC scharakteryzowanych jak wyżej) do przyszłego podania w odstępie czasu
   • Bezpieczeństwo: Monitorowanie pod kątem reakcji na wlew, infekcji i zdarzeń zakrzepowo-zatorowych] 6.2 Kriokonserwowane autologiczne MSC
   • Źródło: Autologiczny tSVF pobrany mikrokanylą lub szpik kostny (BMAC)
   • Kriokonserwacja: Powolne zamrażanie (-1°C/min do -80°C, następnie ciekły azot), 10% DMSO, roztwory kliniczne. Standardowy protokół ACT i monitorowane przechowywanie zgodnie z wymogami FDA
   • Żywotność: ≥ 70% po rozmrożeniu, potwierdzona przez ORFLO Flow Cytometry
   • Dawkowanie: 1-30 × 10^6 komórek w minimalnej objętości sterylnej soli fizjologicznej (zrównoważonej) podawanej we wlewie dożylnym
   • Podanie: Dożylnie (IV) z filtracją 150 u w linii i terapią światłem czerwonym
   • Kontrola jakości: Analiza markerów powierzchniowych, sterylność, endotoksyny, kariotyp w certyfikowanym przez FDA banku komórek – ACT] 6.3 Transplantacja mikrobioty kałowej (FMT)
   • Selekcja dawcy: Badania przesiewowe w kierunku patogenów, pasożytów i wirusów; przetwarzanie zgodnie z GMP FDA
   • Przygotowanie: Standaryzowana, mrożona ludzka mikrobiota kałowa, dostarczana w suchym lodzie
   • Przygotowanie przed leczeniem: 14 dni doustnej wankomycyny, oczyszczenie jelit (MoviPrep), supresja kwasu (Prilosec)
   • Dawkowanie: Wysoka dawka początkowa (doustna/doodbytnicza), następnie codzienne doustne dawki podtrzymujące przez 7-8 tygodni
   • Monitorowanie: Objawy GI i behawioralne (GSRS, CARS, SRS, VABS-II) 14-17]] 6.4 Dieta ketogeniczna/carnivore (Program Carnivore RESET)
   • Dieta: Wysokotłuszczowa, niskowęglowodanowa, oparta na produktach zwierzęcych reset; dobór makroskładników mający na celu wywołanie stanu ketozy (wskaźnik spalania tłuszczu i redukcji insulinooporności).
   • Wyjściowe badania krwi: Poziom glukozy na czczo, poziom insuliny na czczo, hemoglobina A1c, lipidogram, ciała ketonowe na czczo, morfologia, CRP i inne odpowiednie badania
   • Monitorowanie: Dzienniki żywieniowe, ciała ketonowe we krwi, oceny żywieniowe co kwartał
   • Wsparcie: PMC, gastroenterolog itp. Provider lub dietetyk, kontrole zgodności w pobliżu miejsca zamieszkania pacjenta
   • Powtórzenie badań krwi po 90-180 dniach
   • Bezpieczeństwo: Monitorowanie pod kątem zaburzeń metabolicznych, skutków ubocznych ze strony układu pokarmowego 6.5 Trening OT/PT
   • Program: Standaryzowane moduły terapii zajęciowej i fizycznej
   • Kontynuacja działań werbalnych, socjalizacyjnych i edukacyjnych
   • Częstość: 2-3 sesje/tydzień, zindywidualizowane cele (mogą być monitorowane w domu)

7. Plan monitorowania bezpieczeństwa

   • Monitorowanie zdarzeń niepożądanych: Ciągłe, z natychmiastowym raportowaniem SAE
   • Reakcje na wlew: Monitorowanie przed i po wlewie autologicznego cSVF/MSC
   • Bezpieczeństwo diety: Regularne oceny metaboliczne i żywieniowe oraz śledzenie
   • Bezpieczeństwo FMT: Wykluczenie wysokiego ryzyka uczestników, ścisłe monitorowanie pod kątem infekcji

8. Miary wyników i oceny biomarkerów Zakres Narzędzia/Markery Objawy ASD CARS, SRS, ABC, VABS-II; obserwacyjne zachowanie, zmiany socjalizacyjne, zdolności komunikacyjne, Objawy GI Bristol Stool Scale; badanie zarządzania florą bakteryjną jelit Metaboliczne Glukoza we krwi, ciała ketonowe, witamina B6, dopamina Zapalenie Kalprotektyna w kale, IgA w surowicy, OB/CRP Bezpieczeństwo Rejestry AE/SAE, monitorowanie laboratoryjne

   ________________________________________

9. Plan analizy statystycznej

   • Analiza główna: Bezpieczeństwo (AE/SAE) dla każdej interwencji
   • Analiza drugorzędowa: Zmiana skal objawów i biomarkerów (ANCOVA, modele mieszane)
   • Analiza tymczasowa: Kontrola daremności i bezpieczeństwa przy 50% rekrutacji

10. Aspekty regulacyjne i etyczne

    • Zgłoszenie badań klinicznych do FDA/NIH: W celu zatwierdzenia stosowania cSVF, MSC i FMT
    • Zatwierdzenie IRB: NIH/FDA lub uznana równoważna komisja IRB (GARM International Review Board)
    • Świadoma zgoda: Wszyscy uczestnicy/opiekunowie
    • Prywatność danych: Zarządzanie danymi zgodne z HIPAA