Biomarcadores ópticos e bioquímicos no câncer pancreático inicial

A coleta de suco pancreático é realizada por injeção intravenosa de secretina humana sintética aprovada pela FDA (ChiRhoClin Inc., Burtonsville, MD) em uma dose de 0,2 µg/kg será administrada enquanto o endoscópio é posicionado na segunda porção do duodeno. De dentro do duodeno e sem canulação da papila de Vater, um cateter de aspiração de plástico de 2,3 mm (Olympus, Tóquio, Japão) será passado pelo canal de biópsia do endoscópio até ficar visível na tela do monitor endoscópico. Uma vez iniciada a secreção visível ativa através da papila, os primeiros 10 ml de suco pancreático serão coletados por sucção. Todo esse processo, desde a injeção de secretina até a coleta de amostras, leva em média 5 minutos. A amostra é então aliquotada em ampolas de 2 ml, que são congeladas rapidamente em nitrogênio líquido (ou freezer portátil de congelamento rápido) e armazenadas em freezer até que os ensaios sejam realizados. Os 10 principais marcadores candidatos da descoberta e validação em tecido (AUCs >0,95) e do teste piloto de suco pancreático (AUCs >0,9) serão avaliados neste estudo. Após a extração de um equivalente a 0,4 ml de suco pancreático, o DNA será tratado com bissulfito usando métodos otimizados. Em seguida, um ensaio de metilação aberrante em genes-alvo será conduzido usando a técnica QuARTS. Os resultados serão normalizados para um marcador de DNA humano (por exemplo, beta-actina) ou um marcador de DNA metilado identificado para epitélio pancreático normal.