Biomarcatori ottici e biochimici nel carcinoma pancreatico precoce

La raccolta del succo pancreatico viene eseguita mediante iniezione endovenosa di secretina umana sintetica approvata dalla FDA (ChiRhoClin Inc., Burtonsville, MD) alla dose di 0,2 µg/kg che verrà somministrata mentre l'endoscopio è posizionato nella seconda porzione del duodeno. Dall'interno del duodeno e senza cannulazione della papilla di Vater, un catetere di aspirazione in plastica da 2,3 mm (Olympus, Tokyo, Giappone) verrà fatto passare attraverso il canale bioptico dell'endoscopio finché non sarà visibile sullo schermo nel monitor endoscopico. Una volta iniziata la secrezione visibile attiva attraverso la papilla, i primi 10 ml di succo pancreatico saranno raccolti tramite aspirazione. L'intero processo dall'iniezione di secretina alla raccolta del campione richiede in media 5 minuti. Il campione viene quindi aliquotato in fiale da 2 ml, che vengono congelate a scatto in azoto liquido (o congelatore portatile a congelamento rapido) e conservate in congelatore fino all'esecuzione delle analisi. In questo studio saranno valutati i 10 migliori marcatori candidati dalla scoperta e validazione su tessuto (AUC > 0,95) e dal test pilota del succo pancreatico (AUC > 0,9). Dopo l'estrazione da un equivalente di 0.4 ml di succo pancreatico, il DNA sarà trattato con bisolfito utilizzando metodi ottimizzati. Successivamente, verrà condotto un saggio di metilazione aberrante sui geni target utilizzando la tecnica QuARTS. I risultati saranno normalizzati a un marcatore del DNA umano (ad esempio, beta-actina) oa un marcatore del DNA metilato identificato per il normale epitelio pancreatico.