Tropismo e patogênese do vírus influenza e coronavírus em cultura de explante de cérebro humano (COVID-19)
Fundo:
A gripe e o coronavírus têm repetidamente causado pandemia recentemente. Assim como o vírus Influenza A/H7N9, ele causou cinco epidemias na China desde sua primeira detecção no leste da China em 2013. Em 2017, o vírus da gripe aviária de baixa patogenicidade (LPAI) H7N9 sofreu mutação em sua hemaglutinina para dar origem a um vírus da gripe aviária altamente patogênico (HPAI), causando 32 casos humanos e potencialmente representa uma ameaça à saúde animal e humana. Mais recentemente, a pandemia de SARS-CoV-2 tem afetado fortemente o mundo. Portanto, uma plataforma eficaz de avaliação de risco é necessária com urgência para uma melhor preparação para uma pandemia.
Hipótese:
O tropismo tecidual e a patogênese de um vírus infeccioso recém-emergido, como a gripe altamente patogênica, como H7N9 e coronavírus, como SARS-CoV-2, seria diferente daquele de seu subtipo de baixa patogenicidade e infectaria e replicaria o sistema respiratório humano com mais eficiência .
Devido à sua resistência ao oseltamivir para influenza e nenhum antiviral eficaz para o coronavírus, os pesquisadores propõem a criação de uma plataforma de avaliação de risco nova e eficaz para vírus infecciosos emergentes.
Design experimental:
O tropismo tecidual e a cinética de replicação viral de um HPAI e LP influenza e coronavírus serão determinados em culturas ex vivo de cérebro humano e comparados com seu subtipo LP. A competência de replicação e as respostas imunes inatas de influenza e coronavírus serão estudadas e comparadas com outros vírus LP em culturas in vitro de células cerebrais humanas e células endoteliais microvasculares humanas (HMVEC), ambas isoladas de tecidos cerebrais humanos.
Resultados esperados:
A gripe HPAI e o coronavírus, particularmente o SARS-CoV-2, infectarão e replicarão os tecidos e células do cérebro humano com mais eficiência do que o subtipo LP. Além disso, o influenza HPAI e o SARS-CoV-2 induzirão uma resposta imune inata do hospedeiro desregulada do que o subtipo LP.
Visão geral do estudo
Status
Condições
Descrição detalhada
Neste estudo, serão recrutados 80 indivíduos que serão submetidos a craniotomias eletivas ou de emergência para lesões cerebrais intrínsecas no Prince of Wales Hospital.
Trata-se de um estudo prospectivo e qualitativo. Não há randomização no procedimento do estudo nem invenção terapêutica para os sujeitos do estudo. Nenhum produto experimental está envolvido.
Tecidos cerebrais normais descartados durante a operação de pacientes submetidos a craniotomias eletivas ou de emergência por lesões cerebrais intrínsecas serão coletados para este estudo.
Antes do procedimento, será obtido o consentimento para a operação e o uso do tecido removido para pesquisa científica.
Tipo de estudo
Inscrição (Antecipado)
Contactos e Locais
Contato de estudo
- Nome: Owen Ho Ko, Ph.D
- Número de telefone: +852 26352160
- E-mail: ho.ko@cuhk.edu.hk
Locais de estudo
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NT
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Shatin, NT, Hong Kong, 00000
- Recrutamento
- Prince of Wales Hospital
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Contato:
- Owen Ko, PhD
- Número de telefone: 26352160
- E-mail: ho.ko@cuhk.edu.hk
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Contato:
- Pauline Kwan, Master
- Número de telefone: 26352160
- E-mail: paulinekwan@cuhk.edu.hk
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Método de amostragem
População do estudo
Descrição
Critério de inclusão:
- Idade: > 1 ano e < 70 anos
- Submeter-se a craniotomias eletivas ou de emergência para lesões cerebrais intrínsecas
Critério de exclusão:
a. Amostras contendo material infectado
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Modelos de observação: Caso-somente
- Perspectivas de Tempo: Prospectivo
O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Cinética de replicação do vírus influenza usando culturas ex vivo de cérebro humano
Prazo: linha de base
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Os fragmentos de tecido serão infectados com 106 TCID50/mL por 1h a 37°C e depois lavados com 3 ml de PBS quente por três vezes para remover o vírus não ligado.
Para determinar a replicação viral produtiva dos espécimes de biópsia infectados, os sobrenadantes das culturas infectadas serão coletados em 1, 24, 48 e 72 hpi e os títulos virais serão determinados pelo ensaio TCID50.
Culturas de explantes serão fixadas em formol a 10% a 24 e 72hpi e coloração imuno-histoquímica (IHC) contra anticorpo HB65 (European Veterinary Laboratories), SARS-CoV ou anticorpo viral SARS-CoV-2 será realizada para detecção de células infectadas pelo vírus .
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linha de base
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eficiência de replicação e respostas imunes inatas do vírus influenza
Prazo: linha de base
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As células serão infectadas com vírus em MOI de 0,01 ou 2 por 1h.
Após 1h de adsorção do vírus, os vírus serão aspirados e as células serão lavadas com PBS por três vezes, então o meio será reabastecido.
Para células infectadas em MOI de 0,01, o sobrenadante da cultura celular será colhido em 1, 24, 48 e 72 hpi e os títulos virais serão determinados pelo ensaio TCID50.
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linha de base
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Cinética de replicação do coronavírus usando culturas ex vivo de cérebro humano
Prazo: Linha de base
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Os fragmentos de tecido serão infectados com 106 TCID50/mL por 1h a 37°C e depois lavados com 3 ml de PBS quente por três vezes para remover o vírus não ligado.
Para determinar a replicação viral produtiva dos espécimes de biópsia infectados, os sobrenadantes das culturas infectadas serão coletados em 1, 24, 48 e 72 hpi e os títulos virais serão determinados pelo ensaio TCID50.
Culturas de explantes serão fixadas em formol a 10% a 24 e 72hpi e coloração imuno-histoquímica (IHC) contra anticorpo HB65 (European Veterinary Laboratories), SARS-CoV ou anticorpo viral SARS-CoV-2 será realizada para detecção de células infectadas pelo vírus .
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Linha de base
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eficiência de replicação e respostas imunes inatas coronavírus
Prazo: Linha de base
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As células serão infectadas com vírus em MOI de 0,01 ou 2 por 1h.
Após 1h de adsorção do vírus, os vírus serão aspirados e as células serão lavadas com PBS por três vezes, então o meio será reabastecido.
Para células infectadas em MOI de 0,01, o sobrenadante da cultura celular será colhido em 1, 24, 48 e 72 hpi e os títulos virais serão determinados pelo ensaio TCID50.
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Linha de base
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Colaboradores
Investigadores
- Investigador principal: Owen Ho Ko, PhD, Chinese University of Hong Kong
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
Conclusão Primária (Antecipado)
Conclusão do estudo (Antecipado)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- 2022.120
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
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