Avaliação de géis de própolis administrados localmente na periodontite

Trinta e dois pacientes elegíveis com periodontite em estágio II e Grau B foram divididos aleatoriamente em 2 grupos:

• O Grupo 1 (grupo intervenção) foi tratado com RAR combinado com aplicação intrasulcular de gel de própolis a 1%.
• O Grupo 2 (grupo controle) foi tratado com RAR combinada com aplicação intrasulcular de gel placebo.

Critérios de elegibilidade:

Os pacientes foram recrutados de acordo com os seguintes critérios:

Critérios de inclusão

1. Ambos os sexos com idade entre 30 e 50 anos
2. Pacientes sistemicamente saudáveis ​​foram classificados como ASA classe I, II, conforme evidenciado por (índice médico de Cornell modificado)
3. Pacientes com Periodontite de Estágio II, Grau B, de acordo com o workshop mundial de 2017 sobre a classificação de doenças e condições periodontais e peri-implantares. CAL interdental no local de maior profundidade 3-4 mm, sangramento à sondagem (BOP), DP máximo ≤5mm e perda óssea horizontal radiográfica relacionada ao terço coronal da raiz (15%-33%), sem histórico de terapia periodontal ou uso de antibióticos nos últimos 6 meses
4. Paciente sem história de terapia periodontal ou uso de antibióticos ou antiinflamatórios nos últimos 6 meses.
5. Paciente disposto a cumprir as instruções de higiene bucal. Critérios de exclusão

1. Pacientes com alergia conhecida à própolis.
2. Pacientes fumantes ou alcoólatras.
3. Mulheres grávidas e lactantes

Desenho do estudo, randomização e cegamento:

Este estudo foi desenhado como um ensaio clínico randomizado, controlado, de 2 braços paralelos, triplo-cego e de centro único.

Trinta e dois pacientes elegíveis com periodontite em estágio II e Grau B foram divididos aleatoriamente em 2 grupos:

• O Grupo 1 (grupo intervenção) foi tratado com RAR combinado com aplicação intrasulcular de gel de própolis a 1%.
• O Grupo 2 (grupo controle) foi tratado com RAR combinada com aplicação intrasulcular de gel placebo.

Os participantes foram designados aleatoriamente para receber fórmula medicamentosa de Própolis ou Placebo por meio de procedimento de randomização com proporção de alocação de 1:1. Uma lista de randomização gerada por computador usando randomizer.org site foi executado pelo coorientador que não esteve envolvido no recrutamento para fins de ocultação A ocultação da alocação foi realizada pelo coorientador (D. A.) que possuía a lista de randomização e foi contatado por telefone após confirmação da elegibilidade do participante para ser alocado no grupo Própolis ou no grupo Placebo de acordo com a sequência aleatória conhecida pelo coorientador.

O ensaio atual foi um ensaio clínico triplo-cego. O cegamento incluiu pacientes, investigador principal e avaliadores de resultados.

Os pacientes que atenderam aos critérios de elegibilidade foram avaliados clinicamente quanto aos seguintes parâmetros clínicos usando a sonda da Universidade da Carolina do Norte (UNC15)1 (Figura 2). Os parâmetros clínicos foram registrados no gráfico periodontal colorido on-line do Departamento de Periodontia da Universidade de Berna 20102 (

Intervenções:

Preparação de gel de própolis e placebo

• 100 ml de gel Placebo foram preparados misturando 3,344 g de sal sódico de carboximetilcelulose (CMC; El Nasr Pharmaceutical Chemicals Co., Egito).
• 200 mg de sal de sódio metil hidroxibenzoato (Loba Chemie, Índia) como conservante em 81,77 mL de água bidestilada (dDW).
• 18,22 ml de etanol de grau HPLC (Merck, Alemanha) sob agitação contínua durante a noite para garantir a solubilização completa do CMC.
• Para preparar 100 ml de gel de extrato de própolis, foi extraído 1 g de própolis (Imtnan, Egito) com 18,22 ml de etanol.
• em seguida, foram adicionados 10 g de propilenoglicol ao extrato etanólico para aumentar sua solubilidade na fase aquosa.
• O gel de própolis foi então preparado pelo mesmo método do gel placebo, adicionando 3,344 g de CMC dissolvido em água à mistura acima e completando o peso total para 100 g com água destilada.

O gel foi envasado em 20 seringas (5ml) e mantido em geladeira.

Protocolo de Tratamento:

1. Terapia periodontal de Fase I e mapeamento periodontal:

   • O exame inicial foi feito incluindo sondagem total da boca com sonda periodontal UNC15 seguida de exame radiográfico periapical para os locais selecionados (PPD ≤5mm).
   • A motivação e a educação dos pacientes para instruções adequadas de higiene bucal incluíram escovação dentária duas vezes ao dia com escova macia, usando a técnica de escovação Bass modificada e limpeza interdental uma vez ao dia com fio dental e escovas interdentais para amplos espaços interproximais.
   • O desbridamento supra e subgengival total da boca foi realizado com aparelho ultrassônico4 com pontas de raspagem supragengival seguido de curetas universais e de Gracey 5 para desbridamento subgengival adequado. Anestesia local6 foi utilizada para conforto do paciente sempre que necessário.
   • Após 48 horas da última consulta de instrumentação periodontal, os pacientes foram chamados de volta para registro dos parâmetros clínicos basais e coleta da amostra basal do GCF e, em seguida, aplicação local do medicamento.
2. Amostragem de fluido crevicular gengival:

Amostras de fluido crevicular gengival (FGC) foram coletadas de trinta e dois (32) locais selecionados, um em cada paciente; os locais selecionados foram isolados com rolos de algodão e secos suavemente. Uma tira de papel padrão7 foi inserida no sulco até sentir resistência por 30 segundos e depois removida, após a coleta do fluido gengival as tiras foram colocadas em tubos Eppendorf estéreis contendo 100 ul de tampão fosfato PH 7,4 e armazenadas a -20 o C até o momento de análise.

As amostras do GCF foram armazenadas a -20°C até análise posterior após a coleta de todas as amostras na linha de base, com duração de 1 mês e 3 meses para todos os pacientes para avaliação biológica.

1- intervenções:

Após a coleta das amostras do GCF, ocorre a aplicação das intervenções; Própolis ou Placebo de acordo com a sequência aleatória.

Uma microseringa estéril de 1ml9 foi preenchida com o medicamento e em seguida injetada com ponta plástica no sulco, preenchendo toda a área interdental

1- Parâmetros clínicos:

Todos os parâmetros clínicos periodontais foram avaliados no início do estudo, após 3 meses e 6 meses.

Os seguintes parâmetros foram avaliados no pré-operatório:

1. Nível de inserção clínica (CAL).(Ramfjord 1967)
2. Profundidade de sondagem (PD). (Listgarten 1980)
3. Índice gengival (IG) (Löe 1967)).
4. Índice de placa (PI). (Loe 1964)

1. Nível de apego clínico (CAL) (Ramfjord, 1967):

   CAL foi medido como a distância entre os pontos de referência fixos, ou seja, CEJ até a base da bolsa e registrado manualmente em seis locais em cada dente.

   o Dois parâmetros foram registrados em relação ao CAL:

   - CAL médio: CAL foi medido para cada paciente (CAL total em todos os locais/número de superfícies).

   - Média do local CAL mais alto: A medida de perda de inserção clínica mais alta para cada paciente foi registrada e a média do CAL mais alto foi calculada para cada grupo, e isso foi considerado como o desfecho primário

2. Profundidade da bolsa periodontal (PPD) (Listgarten, 1980):

   Para medir o PPD, a sonda foi inserida paralelamente ao longo eixo do dente para atingir o ponto mais profundo da bolsa, e a distância entre a base da bolsa e a margem gengival foi registrada manualmente até a marcação milimétrica mais próxima. Seis leituras foram registradas para cada dente.

   o Dois parâmetros foram registrados em relação ao PPD:

   - PPD médio: O PPD foi medido para cada paciente (PD total/número de superfícies).

   - PPD médio mais profundo: A medida da bolsa mais profunda para cada paciente foi registrada e a média da bolsa mais profunda foi calculada para cada grupo.

3. Índice gengival (IG) (Löe 1967)):

   Os critérios gengivais foram avaliados usando a seguinte pontuação:

   • 0 = gengiva normal.

   • 1 = inflamação leve: leve mudança de cor, leve edema, sem sangramento à sondagem.

   • 2 = inflamação moderada: vermelhidão, edema e vidragem ou sangramento à sondagem.

   • 3 = inflamação grave: vermelhidão e edema acentuados, tendência a sangramento espontâneo, ulceração.

     • O IG foi medido em duas superfícies dos dentes (vestibular e lingual) e uma média foi obtida para todos os dentes e registrada para cada paciente.
4. Índice de placa (PI) (Loe 1964)):

Os depósitos de placa na superfície dos dentes foram avaliados e pontuados da seguinte forma:

• 0=Sem placa
• 1= Uma película de placa aderida à margem gengival livre e à área adjacente do dente. A placa pode ser vista in situ somente após a aplicação da solução reveladora ou pelo uso da sonda na superfície do dente.
• 2= ​​Acúmulo moderado de depósitos moles dentro da bolsa gengival, ou no dente e na margem gengival que podem ser vistos a olho nu.

• 3= Abundância de matéria mole dentro da bolsa gengival e/ou no dente e na margem gengival.

  • O IP foi medido em duas superfícies dos dentes (vestibular e lingual) e uma média foi obtida para todos os dentes e registrada para cada paciente

Avaliação biomecânica quantitativa:

A área examinada será seca com jato de ar suave e isolada com rolos de algodão para evitar contaminação com saliva. A seguir, com uma pinça estéril, um papel perio será inserido na bolsa selecionada e deixado in situ por 30 segundos. Os papéis Perio são colocados em tubos Eppendorf estéreis contendo 100 ul de tampão fosfato PH 7,4 e armazenados a -20 o C até o momento da análise.

As amostras serão analisadas para avaliar o nível de prostaglandina E2 (PGE2) usando kits ELISA disponíveis comercialmente, seguindo as instruções do fabricante. Para todos os pacientes, amostras de fluido crevicular gengival (GCF) serão coletadas e analisadas no início do estudo e três meses após o tratamento periodontal.