CD64 de Neutrófilos Precoce e Tardio e HLA-DR de Monócitos como Biomarcadores para Choque Séptico

Protocolo Detalhado do Estudo

1. Título Neutrófilos CD64 precoce e tardio e HLA-DR de monócitos como biomarcadores para choque séptico.

2. Desenho do Estudo

   • Tipo: Estudo de coorte observacional, prospetivo, unicêntrico.
   • Localização: UCI médica de um hospital universitário de cuidados terciários no norte da Índia.
   • Duração: Janeiro de 2019 - Dezembro de 2019.
   • Aprovação Ética: Comissão de Ética e Investigação Biomédica (BREC/18/194).
   • Diretrizes: Realizado em conformidade com as normas de relato STROBE.

3. Objetivos

   - Objetivo Primário: Avaliar o CD64 dos neutrófilos (nCD64), o HLA-DR dos monócitos (mHLA-DR) e o Índice de Sépsis como marcadores prognósticos no choque séptico.

   • Objetivos Secundários:
   • Comparar os níveis de biomarcadores entre sobreviventes e não sobreviventes.
   • Avaliar a precisão preditiva destes marcadores para mortalidade aos 28 dias utilizando análise ROC.

4. População do Estudo

   • Critérios de Inclusão:
   • Idade ≥18 anos.
   • Diagnóstico de choque séptico de acordo com os critérios Sépsis-3 vigentes.
   • Consentimento informado por escrito do doente ou do próximo de kin.
   • Critérios de Exclusão:
   • Mulheres grávidas.
   • Neoplasia maligna ativa.
   • Doença hepática crónica grave.
   • Doença renal crónica que requer hemodiálise de manutenção.
   • Doentes imunocomprometidos ou sob terapia imunomoduladora antes do início da sépsis.
   • Sépsis não bacteriana (viral, fúngica, tuberculosa).

5. Recrutamento & Tamanho da Amostra

   • Rastreados: 80 doentes.
   • Excluídos: 24 (segundo critérios de exclusão).
   • Cohorte final: 56 doentes (37 sobreviventes, 19 não sobreviventes).
   • Controlos: 20 voluntários saudáveis para valores basais dos biomarcadores.

6. Recolha de Dados

   • Demografia: Idade, sexo, residência, IMC, hábitos tabágicos.
   • Variáveis clínicas: Diagnóstico primário, comorbilidades, escores de gravidade (qSOFA, SIRS, APACHE II), sinais vitais, parâmetros de disfunção orgânica (PaO₂/FiO₂, suporte inotrópico, terapia de substituição renal, GCS).
   • Parâmetros laboratoriais: Hemograma completo, testes de função renal/hepática, GSA, detalhes do diagnóstico primário.
   • Medidas de desfecho: Estadia na UCI, dias de ventilador, mortalidade aos 28 dias.

7. Avaliação dos Biomarcadores

   • Marcadores:
   • CD64 dos neutrófilos (nCD64).
   • HLA-DR dos monócitos (mHLA-DR).
   • Índice de Sépsis = nCD64 ÷ mHLA-DR.
   • Método: Citometria de fluxo (FACS Canto II de 8 cores, BD Biosciences).
   • Unidades: Intensidade Média de Fluorescência (MFI).
   • Pontos temporais:
   • Dia 1 (admissão).
   • Dia 8 (seguimento).

8. Análise Estatística

   • Software: SPSS v24 (IBM).
   • Estatística descritiva: Média ± DP para dados normais; mediana (IIQ) para dados assimétricos.
   • Comparações:
   • Teste t independente para distribuição normal.
   • Teste U de Mann-Whitney para dados assimétricos.
   • Análise preditiva: Curvas ROC para nCD64, HLA-DR e Índice de Sépsis.
   • Limiar de significância: p < 0,05 (bilateral).

9. Desfechos

   • Desfecho primário: Mortalidade aos 28 dias.
   • Desfechos secundários: Duração da estadia na UCI, dias de ventilador, gravidade da disfunção orgânica.

10. Segurança & Conformidade

    • Resíduos biomédicos: Geridos de acordo com as Regras de Gestão e Manuseamento de Resíduos Biomédicos.
    • Segurança do doente: Seguidos os protocolos padrão da UCI; nenhuma intervenção além dos cuidados de rotina.