CD64 dei Neutrofili Precoce e Tardivo e HLA-DR dei Monociti come Biomarcatori per lo Shock Settico

Protocollo Dettagliato dello Studio

1. Titolo CD64 dei neutrofili precoce e tardivo e HLA-DR dei monociti come biomarcatori per lo shock settico.

2. Disegno dello Studio

   • Tipo: Studio prospettico, monocentrico, di coorte osservazionale.
   • Ambiente: Unità di Terapia Intensiva (UTI) medica di un ospedale universitario di assistenza terziaria nel nord dell'India.
   • Durata: Gennaio 2019 - Dicembre 2019.
   • Approvazione Etica: Comitato per la Ricerca Biomedica e l'Etica (BREC/18/194).
   • Linee guida: Condotto in aderenza agli standard di segnalazione STROBE.

3. Obiettivi

   - Obiettivo Primario: Valutare il CD64 dei neutrofili (nCD64), l'HLA-DR dei monociti (mHLA-DR) e l'Indice di Sepsi come marcatori prognostici nello shock settico.

   • Obiettivi Secondari:
   • Confrontare i livelli dei biomarcatori tra sopravvissuti e non sopravvissuti.
   • Valutare l'accuratezza predittiva di questi marcatori per la mortalità a 28 giorni utilizzando l'analisi ROC.

4. Popolazione dello Studio

   • Criteri di Inclusione:
   • Età ≥18 anni.
   • Diagnosi di shock settico secondo i criteri Sepsis-3 prevalenti.
   • Consenso informato scritto del paziente o del parente più prossimo.
   • Criteri di Esclusione:
   • Donne in gravidanza.
   • Neoplasia maligna attiva.
   • Grave malattia epatica cronica.
   • Malattia renale cronica che richiede emodialisi di mantenimento.
   • Pazienti immunocompromessi o in terapia immunomodulante prima dell'esordio della sepsi.
   • Sepsi non batterica (virale, fungina, tubercolare).

5. Arruolamento & Dimensione del Campione

   • Scremati: 80 pazienti.
   • Esclusi: 24 (secondo i criteri di esclusione).
   • Cohort finale: 56 pazienti (37 sopravvissuti, 19 non sopravvissuti).
   • Controlli: 20 volontari sani per i valori basali dei biomarcatori.

6. Raccolta Dati

   • Demografia: Età, sesso, residenza, BMI, stato di fumatore.
   • Variabili cliniche: Diagnosi primaria, comorbidità, punteggi di gravità (qSOFA, SIRS, APACHE II), segni vitali, parametri di disfunzione d'organo (PaO₂/FiO₂, supporto inotropo, terapia renale sostitutiva, GCS).
   • Parametri di laboratorio: Emocromo, test di funzionalità renale/epatica, EGA, dettagli della diagnosi primaria.
   • Misurazioni degli esiti: Permanenza in UTI, giorni di ventilazione, mortalità a 28 giorni.

7. Valutazione dei Biomarcatori

   • Marcatori:
   • CD64 dei neutrofili (nCD64).
   • HLA-DR dei monociti (mHLA-DR).
   • Indice di Sepsi = nCD64 ÷ mHLA-DR.
   • Metodo: Citometria a flusso (FACS Canto II a 8 colori, BD Biosciences).
   • Unità: Intensità Media di Fluorescenza (MFI).
   • Punti temporali:
   • Giorno 1 (ammissione).
   • Giorno 8 (follow-up).

8. Analisi Statistica

   • Software: SPSS v24 (IBM).
   • Statistiche descrittive: Media ± DS per dati normali; mediana (IQR) per dati asimmetrici.
   • Confronti:
   • Test t indipendente per distribuzione normale.
   • Test U di Mann-Whitney per dati asimmetrici.
   • Analisi predittiva: Curve ROC per nCD64, HLA-DR e Indice di Sepsi.
   • Soglia di significatività: p < 0.05 (a due code).

9. Esiti

   • Esito primario: mortalità a 28 giorni.
   • Esiti secondari: durata della permanenza in UTI, giorni di ventilazione, gravità della disfunzione d'organo.

10. Sicurezza & Conformità

    • Rifiuti biomedici: Gestiti secondo le Regole per la Gestione e il Trattamento dei Rifiuti Biomedici.
    • Sicurezza del paziente: Seguiti i protocolli standard di UTI; nessun intervento oltre le cure di routine.