Иммунный ответ на инфекцию микобактериями туберкулеза

В этом исследовании будет изучено, как иммунная система реагирует на заражение бактериями Mycobacterium tuberculosis (бактериями, вызывающими туберкулез), чтобы лучше понять, как микроорганизм вызывает инфекцию и как иммунный ответ может работать для борьбы с инфекцией.

Только примерно один из 10 человек, инфицированных M.tuberculosis, заболевает, иногда спустя годы или даже десятилетия после заражения. Неизвестно, почему некоторые люди заболевают, а большинство нет, но иммунная система людей, у которых никогда не развивается болезнь, может лучше контролировать бактерии. В этом исследовании будет проведена оценка латентной формы инфекции M.tuberculosis для дальнейшего понимания иммунных механизмов, в частности роли некоторых лейкоцитов, участвующих в патологическом процессе.

Здоровые добровольцы в возрасте 18 лет и старше могут участвовать в этом исследовании. Кандидатов проверяют на предмет медицинского анамнеза, семейного анамнеза заболеваний, сексуального анамнеза, истории употребления наркотиков, физического осмотра и анализов крови, включая тест на ВИЧ. Участвовать могут люди в Мали, Западной Африке и в местных клиниках США.

В начале исследования участники сдают анализы крови и туберкулиновую кожную пробу (PPD-тест), которая показывает, подвергался ли человек воздействию бактерий туберкулеза. Для ППД небольшое количество жидкости, содержащей мертвый туберкулезный антиген, вводится под кожу предплечья с помощью иглы. Антиген не может вызывать инфекцию или заболевание.

Через 3 дня участникам делают еще один анализ крови, а место туберкулиновой пробы осматривают на наличие отека, который указывает на положительный результат. Участникам с положительным PPD делают рентген грудной клетки для проверки на туберкулез. Те, у кого рентген также положительный, исключаются из исследования и направляются к врачу для обследования и лечения. Те, у кого рентген отрицательный, возвращаются в клинику в течение 3 недель после туберкулиновой пробы, чтобы сдать еще один образец крови.

Участники, у которых PPD отрицательный, проходят второй туберкулиновый тест через 10–21 день и возвращаются через 3 дня после теста, чтобы определить, является ли он все еще отрицательным или положительным. (Некоторые люди с отрицательным результатом после первого теста могут дать положительный результат после второй процедуры.) Те, чей тест все еще отрицательный, прекращают свое участие в исследовании в это время. Участникам, у которых второй PPD положительный, делают рентген грудной клетки, как описано выше, а те, у кого рентген грудной клетки отрицательный, возвращаются через 3 недели, чтобы сдать последний образец крови.

Целью настоящего исследования является оценка латентной формы этой инфекции, распространенность которой во всем мире превышает распространенность активного заболевания. Наша гипотеза состоит в том, что при латентном туберкулезе антиген-специфические эффекторные CD4+ Т-клетки памяти ответственны за генерацию клинически измеримой гиперчувствительности замедленного типа и что центральные CD4+ Т-клетки памяти не принимают непосредственного участия в этом процессе. Мы основываем эту идею на предположении, что латентный туберкулез представляет собой состояние персистенции антигена и что эффекторные Т-клетки памяти должны поддерживаться до тех пор, пока присутствует антиген/инфекция.

Мы предлагаем провести это исследование в Мали, Западной Африке и местных клиниках в США. Туберкулез поражает 593 человека из 100 000 (2) в Мали, и большинство из них были подвержены этому заболеванию. Кроме того, было бы важно оценить те же параметры на местном уровне, поскольку латентная инфекция является одним из основных факторов реактивации туберкулеза в этой стране. Пациенты будут включены в 4 основные группы: ВИЧ-/ТКП- (группа А), ВИЧ-/ТКП+ (группа В), ВИЧ+/ТКП+ (группа С) и ВИЧ+/ТКП- (группа D).

Чтобы оценить эту гипотезу, мы планируем набрать от 100 до 300 пациентов в течение 2 лет из обеих стран. Образцы крови до и в заранее определенные моменты времени после применения очищенного производного белка (PPD) будут получены для определения доли CD4+ Т-клеток, которые продуцируют гамма-интерферон в ответ на стимуляцию PPD с помощью 16-часового анализа антигенной стимуляции. Будет проведено соответствующее окрашивание для определения фенотипа, а также продукции цитокинов (гамма-интерферона (гамма-интерферона), интерлейкина 2 (IL2) и фактора некроза опухоли (TNF)). Кроме того, будет изучена пролиферация лимфоцитов с использованием сукцинимидилового эфира 5-(и-6)-карбоксифлуоресцеина диацетата (CFSE).

Проводя это исследование, мы надеемся углубить понимание задействованных иммунных механизмов, особенно механизмов памяти Т-клеток, что позволит лучше понять патогенез туберкулеза и ВИЧ. Мы также считаем, что понимание этих механизмов может привести к установлению суррогатов иммунитета в исследованиях противотуберкулезных вакцин, что может улучшить дизайн испытаний вакцин. Это также может помочь лучше понять иммунологическую динамику коинфекции туберкулеза у лиц с ВИЧ-инфекцией.