Однонуклеотидные полиморфизмы ДНК как предикторы токсичности

Большинство больных раком яичников лечат комбинированной химиотерапией на основе препаратов платины и таксанов. В то время как начальная частота ответа высока (> 90%), у некоторых пациентов возникают тяжелые НЯ, которые могут привести к прекращению терапии. Однако и GOG, и листок-вкладыш с паклитакселом содержат рекомендации по лечению, которые предусматривают режим пониженной дозы при возникновении НЯ [1, 2]. Клиническая проверка генетических различий в этих генах как биомаркеров тяжелых НЯ позволила бы лечащему врачу изменить дозировку, тем самым увеличив время, в течение которого пациент может оставаться на препарате, при одновременном снижении побочных эффектов и ненужной заболеваемости.

Другая клиническая ценность этих генетических различий в уходе за пациентами с раком яичников заключается в определении того, какие пациенты могут не получить пользы от внутрибрюшинной (IP) химиотерапии или химиотерапии с высокой дозой. В то время как было показано, что внутрибрюшинная химиотерапия улучшает результаты лечения пациентов, побочные эффекты возникают гораздо чаще и тяжелее из-за высоких доз [3]. Тестирование пациентов перед лечением на предсказательные генотипы может повлиять на решение врача отказаться от внутрибрюшинной химиотерапии в пользу стандартной внутривенной доставки. Химиотерапия с плотной дозой продемонстрировала улучшение результатов, но также и некоторое усиление побочных эффектов [4, 5]. В обоих режимах терапии возможность стратификации пациентов на основе рисков токсичности, связанных с лечением, может привести к большей пользе внутрибрюшинного введения или терапии с высокой дозой при минимизации побочных эффектов и связанных с ними затрат на здравоохранение.

Предыдущие исследования рака яичников показали, что экспрессия белков ERCC1, GST и p53 может влиять на ответ на терапию на основе платины у пациентов с раком яичников [6-13]. При оценке SNP в генах, кодирующих эти белки, была установлена ​​корреляция с НЯ в ответ на терапию препаратами платины [14, 15]. Мутации, влияющие на активность ERCC1, были связаны с нефротоксичностью. Мутации у членов семейства GST были связаны с нейтропенией (GSTA1), невропатией (GSTM3 и GSTP1) или анемией и тромбоцитопенией (GSTM3). Мутации в p53 были связаны с нейтропенией. В этих исследованиях также было обнаружено, что мутации в XPD и XRCC1 являются предикторами нейтропении (как XPD, так и XRCC1) и анемии (только XPD). Совсем недавно исследование, проведенное Шотландской группой гинекологических клинических испытаний, выявило SNP в BCL2, Дата текущей версии: 01.04.15 Дата предыдущей версии: нет данных, Первоначальная версия Страница 6 из 23 OPRM1 SOX10 и TRPV1, которые были связаны с нейротоксичностью. [16]. Необходимо оценить как индивидуальное, так и комбинированное значение этих биомаркеров.

Обзор исследований, проведенных при других типах опухолей, выявил SNP, связанные с токсичностью, которые также могут быть применимы при раке яичников. При раке молочной железы SNP в генах CYP2C8, CYP17A1 и ABCG1 связаны с повышенным риском периферической нейропатии 2+ степени у пациентов, получающих терапию на основе таксанов. [17, 18]. Ранее также сообщалось, что другой SNP в CYP17A1 (rs619824) связан с вызванной бортезомибом нейропатией у пациентов с множественной миеломой, что потенциально подтверждает роль этого белка в возникновении нейропатии [19]. Поскольку эти SNP являются различиями зародышевой линии, есть основания полагать, что они могут быть также ценными биомаркерами при раке яичников. Было высказано предположение, что при множественной миеломе выявление и тщательный мониторинг пациентов с риском нейропатии могут быть полезными [20]. Аналогичная стратегия может быть использована у пациентов с раком яичников для уменьшения выраженной токсичности, которая приводит к прекращению приема эффективного препарата.

Обнаружение этих полиморфизмов с помощью КПЦР было подтверждено прямым секвенированием клеточных линий и опухолевой ткани. Протокол был протестирован в нашей исследовательской лаборатории и подтвержден в лаборатории, регулируемой CLIA, как для фиксированных формалином образцов, залитых парафином, так и для крови. Вкратце, ДНК очищают на спин-колонке, определяют ее количество и смешивают со специфическим анализом SNP и Master Mix (Life Technologies). Результаты анализировали в программном обеспечении Life Technologies TaqMan Genotyper версии 1.3 для определения генотипа. SNP были обнаружены в образцах крови, взятых у пациентов с раком яичников, и образцах рака яичников FFPE с такой же частотой, как сообщалось в статьях, упомянутых выше. SNP от других типов опухолей были обнаружены в тех же образцах крови от больных раком яичников или образцах FFPE рака яичников, а также в образцах крови и FFPE от больных раком эндометрия.