Polimorfismi a singolo nucleotide del DNA come predittori di tossicità

La maggior parte delle pazienti con carcinoma ovarico viene trattata con una combinazione di chemioterapia a base di platino e taxani. Sebbene i tassi di risposta iniziale siano elevati (>90%), alcuni pazienti manifestano eventi avversi gravi che possono portare all'interruzione della terapia. Tuttavia, sia il GOG che il foglietto illustrativo del paclitaxel includono linee guida terapeutiche che comportano un regime posologico ridotto in caso di eventi avversi [1, 2]. La validazione clinica delle differenze genetiche in questi geni come biomarcatori per eventi avversi gravi consentirebbe al medico curante di modificare il dosaggio, aumentando così il tempo in cui un paziente potrebbe rimanere sul farmaco riducendo gli effetti collaterali e la morbilità non necessaria.

Un'altra utilità clinica di queste differenze genetiche nella cura dei pazienti con carcinoma ovarico è nell'identificazione di quali pazienti potrebbero non beneficiare della chemioterapia intraperitoneale (IP) o della chemioterapia dose-densa. Mentre la chemioterapia IP ha dimostrato di migliorare l'esito del paziente, gli effetti collaterali sono molto più frequenti e gravi a causa della dose elevata [3]. Testare i pazienti prima del trattamento per genotipi predittivi può influire sulla decisione di un medico di rinunciare alla chemioterapia IP a favore della somministrazione endovenosa standard. La chemioterapia ad alta dose ha dimostrato miglioramenti nei risultati ma anche alcuni aumenti degli effetti collaterali [4, 5]. In entrambi i regimi terapeutici, la capacità di stratificare i pazienti in base ai rischi di tossicità associati al trattamento può portare a un maggiore beneficio dell'IP o della terapia a dose densa, riducendo al minimo gli effetti collaterali e i costi sanitari associati.

Precedenti studi sul carcinoma ovarico hanno dimostrato che l'espressione delle proteine ​​ERCC1, GST e p53 può influenzare la risposta alle terapie a base di platino nelle pazienti con carcinoma ovarico [6-13]. Quando sono stati valutati gli SNP nei geni che codificano queste proteine, è stata effettuata una correlazione con gli eventi avversi in risposta alle terapie a base di platino [14, 15]. Le mutazioni che hanno influenzato l'attività di ERCC1 sono state associate a nefrotossicità. Le mutazioni nei membri della famiglia GST erano associate a neutropenia (GSTA1), neuropatia (GSTM3 e GSTP1) o anemia e trombocitopenia (GSTM3). Le mutazioni in p53 erano associate a neutropenia. In questi studi, anche le mutazioni in XPD e XRCC1 sono risultate predittive di neutropenia (sia XPD che XRCC1) e anemia (solo XPD). Più recentemente, uno studio condotto dallo Scottish Gynecological Clinical Trials Group ha identificato gli SNP in BCL2, Data versione attuale: 04/01/15 Data versione precedente: N/A, Versione iniziale Pagina 6 di 23 OPRM1 SOX10 e TRPV1 associati a neurotossicità [16]. È necessario valutare sia il valore individuale che quello combinato di questi biomarcatori.

La revisione degli studi condotti su altri tipi di tumore ha identificato gli SNP associati a tossicità che possono essere applicabili anche al carcinoma ovarico. Nel carcinoma mammario, gli SNP nei geni CYP2C8, CYP17A1 e ABCG1 sono stati associati a un aumentato rischio di neuropatia periferica di grado 2+ nei pazienti trattati con terapie a base di taxani. [17, 18]. È stato anche riportato in precedenza che un diverso SNP nel CYP17A1 (rs619824) è associato alla neuropatia indotta da bortezomib nei pazienti con mieloma multiplo, supportando potenzialmente il ruolo di questa proteina nell'insorgenza della neuropatia [19]. Poiché questi SNP sono differenze della linea germinale, c'è motivo di credere che possano essere preziosi biomarcatori anche nel cancro ovarico. Nel mieloma multiplo, è stato suggerito che l'identificazione e il monitoraggio più attento dei pazienti a rischio di neuropatia potrebbero essere utili [20]. Una strategia simile potrebbe essere utilizzata con pazienti con carcinoma ovarico per ridurre le gravi tossicità che si traducono nell'interruzione di un farmaco efficace.

Il rilevamento di questi polimorfismi mediante QPCR è stato confermato dal sequenziamento diretto di linee cellulari e tessuto tumorale. Il protocollo è stato testato nel nostro laboratorio di ricerca ed è stato convalidato nel nostro laboratorio regolamentato CLIA sia per campioni inclusi in paraffina fissati in formalina che per sangue. In breve, il DNA viene purificato su una colonna rotante, quantificato e miscelato con uno specifico dosaggio SNP e Master Mix (Life Technologies). I risultati sono stati analizzati nel software Life Technologies TaqMan Genotyper versione 1.3 per determinare il genotipo. Gli SNP sono stati rilevati in campioni di sangue raccolti da pazienti con carcinoma ovarico e campioni di carcinoma ovarico FFPE con frequenze simili a quelle riportate nei documenti sopra citati. SNP di altri tipi di tumore sono stati rilevati negli stessi campioni di sangue di pazienti con carcinoma ovarico o campioni di carcinoma ovarico FFPE, nonché in campioni di sangue e FFPE di pazienti con carcinoma endometriale.