Заболевание поверхности глаза у пациентов с хронической болезнью трансплантата против хозяина (РТПХ)

Сухость глаз — многофакторное заболевание, часто встречающееся в офтальмологической практике. Общие симптомы сухости глаз включают раздражение глаз, тяжесть век, нечеткость зрения и чувствительность к свету (1). Распространенность синдрома сухого глаза во всем мире, как правило, высока (2-4). В Азии сухость глаз может затронуть до 22% взрослых старше 40 лет в Китае (5) и Японии (3). У азиатских пациентов старше 65 лет распространенность синдрома сухого глаза может достигать 80 %, если диагноз основан на аномальной стабильности слезной жидкости, или до 60 % при дисфункции мейбомиевых желез (ДМЖ), основной причине нестабильности слезной жидкости. 6).

Большинство пациентов с синдромом сухого глаза можно успешно лечить с помощью лубрикантов, точечной окклюзии, глазных капель со стероидами и/или циклоспорином. Тем не менее, у некоторых пациентов с тяжелой формой сухости глаз и вероятными сопутствующими заболеваниями, такими как болезнь «трансплантат против хозяина» (РТПХ), исчерпавших возможности обычного лечения, может быть 10-20 случаев в год, и их трудно лечить. Эти пациенты и их врачи беспомощны, когда сталкиваются с такими сценариями.

Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ТСК) признана потенциальной лечебной терапией гематологических злокачественных новообразований (9). За последние 2 десятилетия число получателей SCT во всем мире увеличилось в геометрической прогрессии. РТПХ является основной причиной заболеваемости и смертности у пациентов, перенесших аллогенную ТСК (10).

Сухость глаз, связанная с хронической РТПХ, является одним из основных поздних осложнений после аллогенной СКТ; он оказывает значительное влияние на качество жизни пациентов (11-13) и может привести к слепоте (14). Иммунологический процесс сухости глаз, связанный с хронической РТПХ, остается в значительной степени неизвестным, но считается, что это традиционная аллореактивность к тканям реципиента.

Исследователи предлагают сотрудничать с отделением гематологии Сингапурской больницы общего профиля, чтобы сосредоточиться на клинических характеристиках и иммунологическом профиле воспаления глазной поверхности у пациентов с более тяжелой хронической РТПХ. Тяжесть сухости глаз более выражена у пациентов с хронической РТПХ при СНЭК по сравнению с идиопатическими случаями сухости глаз. Это может быть связано с предвзятостью направления или может быть связано с системным заболеванием. Таким образом, исследователи намерены провести пилотное исследование, чтобы определить некоторые глазные характеристики ненаправленных гематологических пациентов с РТПХ. Исследователи предлагают провести скрининг и набрать 30 подходящих участников с хронической РТПХ. Будущие тесты будут включать визуализацию глаза (Oculus K5M), иммунологический профиль глаза (иммунные клетки конъюнктивы) и воспаление поверхности глаза (маркер слез MMP-9).

1 ГИПОТЕЗА И ЦЕЛИ

Таким образом, это исследование направлено на изучение воспаления глазной поверхности у пациентов с хронической РТПХ путем исследования конъюнктивальных клеток и клинической визуализации покраснения конъюнктивы и стабильности слезы. Следовательно, исследователи ожидают обнаружить увеличение популяции воспалительных клеток в образцах конъюнктивы РТПХ.

Конкретные цели:

1. Определить глазной иммунологический профиль (конъюнктивальные иммунные клетки) пациентов с РТПХ и соотнести с системным статусом (лечением).
2. Определить, являются ли объективные показатели слезной дисфункции/воспаления глазной поверхности аномальными у пациентов с РТПХ и коррелируют ли они с системным статусом.

Результаты:

• Симптомы сухости глаз (опросник SPEED)
• Производство слез
• Профиль иммунных клеток конъюнктивы (доля Т-лимфоцитов и других иммунных клеток)
• Клинические параметры поверхности глаза (покраснение конъюнктивы, время неинвазивного разрыва слезы, окрашивание флюоресцеином роговицы)

Долгосрочные цели:

1. Установить критерии скрининга больных с РТВГ для направления к офтальмологам.
2. Определить продольные исходы случаев хГВГ с синдромом сухого глаза и эффекты системного профилактического лечения, а также других методов лечения глаз, таких как глазные капли для плазмафереза.

1.1.1 Потенциальные риски Исследователи предполагают минимальный риск и дискомфорт, связанные с этим исследованием.

• Возможно, что при заборе клеток конъюнктивы с помощью оттискной мембраны может возникнуть небольшой дискомфорт.
• Небольшой дискомфорт от менискометрии со слезной полоской.
• Участники могут испытывать легкое раздражение при введении набора для тестирования InflammaDry, так как для сбора слез на нижнее веко участника необходимо положить мягкую подушечку из абсорбирующего материала.
• Ощущение жжения в результате местного анестетика (алкаин)

1.1.2 Потенциальные преимущества Благодаря лучшему пониманию присутствия различных медиаторов воспаления исследователи могут лучше понять сложный процесс, происходящий у пациентов с хронической РТПХ.

2 ИССЛЕДУЕМАЯ ГРУППА 3.1 Перечислите количество и характер субъектов, подлежащих зачислению. Тридцать подходящих пациентов с РТПХ будут проверены и набраны из Центра трансплантологии, расположенного в блоке 7, уровень 1, Сингапурская больница общего профиля — отделение гематологии.

3.2 Критерии найма и процесс найма

1. Субъекты соответствуют всем критериям включения
2. Без критериев исключения.

Перед набором испытуемых необходимо получить разрешение у лечащих врачей отделения гематологии SGH. Подходящие предметы будут консультированы по поводу исследования. Если субъект заинтересован, от всех участников будет получено информированное письменное согласие. После этого оптометрист-исследователь SERI проведет осмотр глаз в Центре трансплантации SGH.

4 ДИЗАЙН ИССЛЕДОВАНИЯ

4.1.1 Процедуры исследования

Экзамены будут проводиться членами исследовательской группы SERI. Список необходимых обследований представлен:

1. Симптомы сухости глаз (опросник SPEED)
2. Неинвазивное время разрыва слезы (NIKBUT) — Oculus K5M
3. Покраснение конъюнктивы — Oculus K5M
4. Менискометрия слезной полоски (SMTube), тест Ширмерса
5. Результат разрыва MMP-9 (Inflammadry)
6. Импрессионная цитология с использованием конъюнктивальных мембран EyePrim
7. Окрашивание роговицы флуоресцеином — Oculus K5M

Подробности процедур

1. Анкета по сухости глаз Участникам будет предложено заполнить анкету по сухости глаз, чтобы оценить тяжесть симптоматики сухости глаз и степень нарушения повседневной деятельности за последние две недели.

   • Опросник SPEED Состоит из 2 вопросов о частоте и серьезности, оцениваемых по шкале от 0 до 3 по частоте и по шкале от 0 до 4 по серьезности. Анкета позволяет пациенту оценить от 0 (никогда) до 3 (все время) по частоте, 0 (нет проблем) и 4 (невыносимая тяжесть).

2. Неинвазивное время разрыва слезы (NIBUT) Для неинвазивного определения времени разрыва слезы будет использоваться кератограф Oculus 5M (Oculus, Wetzlar, Germany). Пациент удобно сядет перед прибором и будет свободно моргать, фиксируя цель прямо перед собой. Когда пациент будет готов, ему будет предложено дважды моргнуть и воздержаться от моргания. Кератограф 5М полностью автоматизирован, он зафиксирует любой разрыв или искажение изображения и зафиксирует время разрыва. Для каждого глаза будут сняты три показания, чтобы получить среднее значение. Возможно, слезная пленка участников более стабильна, т.е. увеличено время разрыва слезы.
3. Визуализация покраснения конъюнктивы с помощью Oculus Keratography 5M
4. Менискометрия с отрывными полосками (SMTube) Извлеките SMTube из стерильного пакета. Удерживайте центр SMTube. Не прикасайтесь к области окрашивания. Погрузите кончик трубки SMTube в латеральный слезный мениск нижнего века глаза на 5 секунд. Примите дополнительные меры предосторожности, чтобы наконечник не касался конъюнктивы пациента. Через 5 секунд удалите трубку SMTube из слезного мениска нижнего века. Измерьте длину столбика, окрашенного в синий цвет.
5. Результат слезы MMP-9 (Inflammadry) Тест InflammaDry будет проводиться после проведения слезной менискометрии, так как он оценивает уровни MMP-9 (маркер воспаления) в слезах и, следовательно, не влияет на рефлекторное слезоотделение (15). Флис тест-полоски прикасается к внутренней поверхности нижнего века в нескольких местах, пациента просят моргнуть, а затем полоску кладут вдоль нижней носовой пальпебральной конъюнктивы еще на 5 секунд. Вставьте ткань для отбора проб в окно переноса проб корпуса тест-кассеты. После чего впитывающий наконечник погружают в буферный раствор на 20 секунд. Снимите впитывающий наконечник с флакона с буфером, наденьте защитный колпачок и положите тест на горизонтальную поверхность на 10 минут. Одна синяя линия указывает на отрицательный результат, а появление двух линий (красной и синей) указывает на положительный результат.

6. Импрессионная цитология (с использованием мембран EyePrim)

   i) Приготовление раствора RPMI В стерильном боксе биобезопасности подготовьте 2 флакона с 2 мл пробирками Эппендорфа. Одна трубка для правого и левого глаза соответственно. Заполните 2 пробирки 1,5 мл раствора RPMI. После этого переместите пробирки в холодильник со льдом и перенесите в Центр трансплантологии, расположенный в SGH, где будет сделан оттиск.

   ii) Анестезия Шаг 1: Сообщите участнику, что он/она может испытывать временное жжение. Просьба к участнику направить взгляд вверх. Надавите на нижнее веко и поместите одну каплю МА в нижний свод глазного яблока. Сделайте это для обоих глаз. Попросите пациента осторожно моргнуть не менее 3 раз. Шаг 2: Как только жжение утихнет, попросите участника направить взгляд вниз. Поднимите верхнее веко пациента и поместите каплю МА на бульбарную конъюнктиву в самой верхней точке. Сделайте это для обоих глаз. Попросите пациента осторожно моргнуть не менее 3 раз. Шаг 3: Повторите шаг 2 еще раз. В этот момент участник не должен ощущать жжения в глазах.

   iii) Отбор проб конъюнктивы Шаг 1: Попросите участника направить взгляд в нижневисочном направлении. Это обнажает верхнюю носовую бульбарную конъюнктиву для оттиска. Шаг 2: Нанесите мембрану EyePRIM на пораженный участок. Шаг 3: Обеспечьте хорошее прилегание мембраны к конъюнктиве. Сделайте это, покачивая мембрану EyePRIM влево и вправо. Шаг 4: Снимите мембрану с конъюнктивы отшелушивающим движением. Шаг 5: Приложите большее усилие к пружинному механизму EyePRIM. После звука «щелчка» мембрана будет выброшена из гаджета. Поместите мембрану из правого глаза в «правую» пробирку Эппендорф. Шаг 6: Повторите для верхней височной бульбарной конъюнктивы, на этот раз направляя взгляд участника инферо-назально. Поместите эту мембрану в «правильную» пробирку Эппендорф. В этой пробирке Эппендорф должно быть 2 мембраны. Шаг 7: Поместите эту трубку в коробку со льдом. Шаг 8: Повторите шаги 1-7 для другого глаза, но поместите мембраны в «левую» пробирку Эппендорф. Шаг 9: На этом этапе должны быть как «правая», так и «левая» пробирки Эппендорфа, каждая с 2 мембранами внутри, погруженными в 1,5 мл среды RPMI. Поместите их в коробку со льдом.

   iv) Отделение клеток от мембран. С помощью наконечника микропипетки на 10 мкл соскребите клетки с мембраны. Убедитесь, что чистите мембрану с правильной стороны (это можно сделать, ориентируясь на крюки мембраны). Проще всего это сделать, прижав мембрану к стенке пробирки и соскребая ее размалывающим движением (стенка пробирки представляет собой ступку, а кончик микропипетки подобен пестику). Повторите для другой мембраны в той же пробирке. Также повторите те же действия для другого глаза. После завершения выскабливания клеток поместите 2 пробирки Эппендорфа на лед и передайте в Aihua или Tanima (Academia Level 12) для анализа FAC в тот же день.

7. Оценка окрашивания роговицы флуоресцеином