Malattia della superficie oculare nei pazienti con malattia cronica del trapianto contro l'ospite (GVHD).

L'occhio secco è una malattia multifattoriale che si incontra frequentemente nella pratica oftalmologica. I sintomi comuni dell'occhio secco includono irritazione oculare, pesantezza delle palpebre, visione offuscata e sensibilità alla luce (1). La prevalenza mondiale dell'occhio secco è generalmente alta (2-4). In Asia, l'occhio secco può colpire fino al 22% degli adulti sopra i 40 anni in Cina (5) e Giappone (3). Nei pazienti asiatici di età superiore ai 65 anni, i tassi di prevalenza dell'occhio secco possono raggiungere l'80% se la diagnosi si basa su una stabilità lacrimale anormale, o fino al 60% sulla disfunzione della ghiandola di Meibomio (MGD), una delle principali cause di instabilità lacrimale. 6).

La maggior parte dei pazienti con occhio secco può essere gestita con successo con lubrificanti, occlusione puntiforme, colliri steroidi e/o ciclosporina. Tuttavia, alcuni pazienti con secchezza oculare grave e probabili malattie sottostanti, ad esempio la malattia del trapianto contro l'ospite (GVHD), che hanno esaurito i trattamenti convenzionali, possono ammontare a 10-20 casi all'anno e sono difficili da gestire. Questi pazienti ei loro medici sono impotenti di fronte a questi scenari.

Il trapianto di cellule staminali ematopoietiche (SCT) è stato stabilito come una potenziale terapia curativa per le neoplasie ematologiche (9). Il numero di destinatari di SCT è aumentato in modo esponenziale in tutto il mondo negli ultimi 2 decenni. La GVHD è la principale causa di morbilità e mortalità nei pazienti sottoposti a SCT allogenico (10).

L'occhio secco associato a GVHD cronica è una delle principali complicanze tardive dopo SCT allogenico; ha un impatto significativo sulla qualità della vita dei pazienti (11-13) e può portare alla cecità (14). Il processo immunologico dell'occhio secco associato alla GVHD cronica rimane in gran parte sconosciuto, ma si ritiene che sia l'alloreattività tradizionale ai tessuti riceventi.

I ricercatori propongono di collaborare con il Singapore General Hospital, Dipartimento di Ematologia, per concentrarsi sulle caratteristiche cliniche e sul profilo immunologico dell'infiammazione della superficie oculare nei pazienti con GVHD cronica più grave. La gravità dell'occhio secco è più grave nei pazienti con GVHD cronica allo SNEC, rispetto ai casi idiopatici di occhio secco. Ciò può essere dovuto a bias di riferimento o può essere correlato alla malattia sistemica. Pertanto, i ricercatori intendono condurre uno studio pilota per definire alcune caratteristiche oculari di pazienti ematologici non riferiti con GVHD. Gli investigatori propongono di selezionare e reclutare 30 partecipanti idonei con GVHD cronica. I test da eseguire includeranno l'imaging oculare (Oculus K5M), il profilo immunologico oculare (cellule immunitarie della congiuntiva) e l'infiammazione della superficie oculare (marcatore lacrimale MMP-9).

1 IPOTESI E OBIETTIVI

Questo studio mira quindi a profilare l'infiammazione della superficie oculare dei pazienti con GVHD cronica studiando le cellule congiuntivali e l'imaging clinico per il rossore congiuntivale e la stabilità lacrimale. Pertanto, i ricercatori si aspettano di trovare un aumento della popolazione di cellule infiammatorie nei campioni congiuntivali GVHD.

Obiettivi specifici:

1. Determinare il profilo immunologico oculare (cellule immunitarie congiuntivali) dei pazienti con GVHD e correlarlo allo stato sistemico (trattamento).
2. Determinare se le misure oggettive della disfunzione lacrimale/infiammazione della superficie oculare sono anormali nei pazienti con GVHD e correlate allo stato sistemico.

Risultati:

• Sintomi dell'occhio secco (questionario SPEED)
• Produzione di lacrime
• Profilo delle cellule immunitarie congiuntivali (percentuale di linfociti T e altre cellule immunitarie)
• Parametri clinici per la superficie oculare (arrossamento congiuntivale, tempo di rottura lacrimale non invasivo, colorazione corneale con fluoresceina)

Obiettivi a lungo termine:

1. Stabilire i criteri per lo screening dei pazienti cGVH per il rinvio a specialisti oftalmici.
2. Determinare gli esiti longitudinali dei casi di secchezza oculare cGVH e gli effetti del trattamento profilattico sistemico, nonché di altri trattamenti oculari come i colliri per la plasmaferesi.

1.1.1 Rischi potenziali Gli investigatori anticiperanno il rischio minimo e il disagio coinvolti in questo studio.

• È possibile che durante il campionamento delle cellule congiuntivali utilizzando la membrana per impronte si verifichi un leggero disagio
• Qualche leggero fastidio da meniscometria a strisce lacrimali
• I partecipanti possono avvertire una leggera irritazione quando viene somministrato il kit di test InflammaDry, poiché richiede il posizionamento di un tampone morbido in materiale assorbente sulla palpebra inferiore del partecipante per raccogliere le lacrime.
• Sensazione di bruciore a seguito di anestesia locale (alcaina)

1.1.2 Potenziali benefici Con una maggiore comprensione della presenza di vari mediatori dell'infiammazione, i ricercatori possono ottenere ulteriori informazioni sul complesso processo che si svolge nei pazienti con GVHD cronica.

2 POPOLAZIONE IN STUDIO 3.1 Elenco Il numero e la natura dei soggetti da arruolare. Trenta pazienti affetti da GVHD idonei saranno sottoposti a screening e reclutati dal Centro trapianti situato al Blocco 7, Livello 1, Singapore General Hospital- Dipartimento di ematologia.

3.2 Criteri per il reclutamento e il processo di reclutamento

1. I soggetti soddisfano tutti i criteri di inclusione
2. Privo di criteri di esclusione.

Il permesso sarebbe richiesto ai medici curanti del SGH, Dipartimento di Ematologia prima che i soggetti vengano reclutati. I soggetti idonei saranno consigliati sullo studio. Se il soggetto è interessato, sarà ottenuto il consenso scritto informato da tutti i partecipanti. Successivamente, l'optometrista di ricerca SERI procederà con l'esame oculare presso il Centro Trapianti SGH.

4 PROGETTAZIONE DI STUDIO

4.1.1 Procedure dello studio

Gli esami saranno svolti dai membri del gruppo di studio della SEFRI. Viene visualizzato l'elenco degli esami richiesti:

1. Sintomi dell'occhio secco (questionario SPEED)
2. Tempo di rottura lacrimale non invasivo (NIKBUT) - Oculus K5M
3. Rossore congiuntivale - Oculus K5M
4. Meniscometria lacrimale (SMTube), test di Schirmers
5. Risultato lacrimale MMP-9 (infiammazione)
6. Impression Cytology- usando le membrane congiuntivali EyePrim
7. Colorazione corneale con fluoresceina - Oculus K5M

Dettagli delle procedure

1. Questionario sull'occhio secco Ai partecipanti verrà chiesto di compilare un questionario sull'occhio secco per valutare la gravità sintomatica della secchezza oculare e l'entità della sua interruzione delle attività quotidiane nelle ultime due settimane.

   • Questionario VELOCITÀ Consiste in 2 domande sulla frequenza e sulla gravità classificate su una scala da 0 a 3 per la frequenza e da 0 a 4 per la gravità. Il questionario consente al paziente di valutare da 0 che è mai e 3 che è sempre in frequenza e 0 come nessun problema e 4 come intollerabile in gravità.

2. Tempo di rottura lacrimale non invasivo (NIBUT) Il cheratografo Oculus 5M (Oculus, Wetzlar, Germania) verrà utilizzato per eseguire il tempo di rottura lacrimale non invasivo. Il paziente si siederà comodamente davanti allo strumento e sbatterà le palpebre liberamente mentre si fissa su un bersaglio direttamente davanti. Una volta che il paziente è pronto, al paziente verrà chiesto di sbattere le palpebre due volte e di astenersi dallo sbattere le palpebre. Keratograph 5M è completamente automatizzato e catturerà qualsiasi interruzione o distorsione nell'immagine e verrà annotata l'ora dell'interruzione. Saranno prese tre letture per ciascun occhio per ottenere il valore medio. È possibile che il film lacrimale dei partecipanti sia più stabile, ovvero che il tempo di rottura lacrimale sia aumentato.
3. Imaging del rossore congiuntivale con Oculus Keratography 5M
4. Meniscometria con striscia lacrimale (SMTube) Rimuovere SMTube dalla busta sterile. Tieni il centro di SMTube. Non toccare l'area della tintura. Immergere la punta dell'SMTube nel menisco lacrimale laterale della palpebra inferiore di un occhio per 5 secondi. Prendere ulteriori precauzioni per evitare che la punta tocchi la congiuntiva dei pazienti. Dopo 5 secondi, rimuovere SMTube dal menisco lacrimale della palpebra inferiore. Misurare la lunghezza della colonna macchiata di colore blu.
5. Risultato MMP-9 lacrimale (Inflammadry) Il test InflammaDry verrà somministrato dopo l'esecuzione della meniscometria lacrimale, poiché valuta i livelli di MMP-9 (un marker infiammatorio) nelle lacrime e quindi non è influenzato dalla lacrimazione riflessa (15). Il vello della striscia reattiva viene tamponato lungo il rivestimento interno della palpebra inferiore in più punti, al paziente viene chiesto di sbattere le palpebre e la striscia viene quindi appoggiata lungo la congiuntivale palpebrale nasale inferiore per altri 5 secondi. Assemblare il vello di campionamento nella finestra di trasferimento del campione del corpo della cassetta del test. Dopo di che la punta assorbente viene immersa nella soluzione tampone per 20 secondi. Rimuovere la punta assorbente dalla fiala del tampone, rimettere il cappuccio protettivo e appoggiare il test su una superficie orizzontale per 10 minuti. Una singola linea blu indica un risultato negativo, mentre la comparsa di 2 linee (rossa e blu) indica un risultato positivo.

6. Citologia dell'impronta (utilizzando le membrane EyePrim)

   i) Preparazione della soluzione RPMI In una cappa di biosicurezza sterile, preparare 2 fiale di provette Eppendorf da 2 ml. Un tubo rispettivamente per l'occhio destro e l'occhio sinistro. Riempire le 2 provette con 1,5 ml di soluzione RPMI. Successivamente, trasferire i tubi in una ghiacciaia contenente ghiaccio e trasferirli al Centro Trapianti situato presso SGH dove verrà eseguita l'impronta.

   ii) Anestesia Passaggio 1: informare il partecipante che potrebbe avvertire una sensazione di bruciore transitoria. Richiesta al partecipante di dirigere lo sguardo verso l'alto. Abbassare la palpebra inferiore e posizionare una goccia di LA nel fornice palpebrale inferiore. Fallo per entrambi gli occhi. Richiedere al paziente di ammiccare dolcemente per almeno 3 volte. Passaggio 2: una volta che il bruciore si attenua, chiedi al partecipante di dirigere lo sguardo verso il basso. Sollevare la palpebra superiore del paziente e posizionare una goccia di LA sulla congiuntiva bulbare nel punto più alto possibile. Fallo per entrambi gli occhi. Richiedere al paziente di ammiccare dolcemente per almeno 3 volte. Passaggio 3: ripetere il passaggio 2 ancora una volta. Il partecipante non dovrebbe essere in grado di provare alcuna sensazione di bruciore dell'occhio a questo punto.

   iii) Campionamento congiuntivale Passaggio 1: richiedere al partecipante di dirigere il proprio sguardo nella direzione infero-temporale. Questo espone la congiuntiva bulbare nasale superiore per l'impronta. Passaggio 2: applicare la membrana EyePRIM sull'area. Passaggio 3: garantire una buona apposizione della membrana con la congiuntiva. Fallo facendo oscillare la membrana EyePRIM a sinistra ea destra. Passaggio 4: rimuovere la membrana dalla congiuntiva con un movimento simile a un peeling. Passaggio 5: esercitare una forza maggiore sul meccanismo a molla EyePRIM. Dopo un "clic", la membrana verrà espulsa dal gadget. Posizionare la membrana dall'occhio destro nella provetta eppendorf "destra". Passaggio 6: Ripetere per la congiuntiva bulbare temporale superiore, questa volta dirigendo lo sguardo del partecipante infero-nasale. Posizionare questa membrana nella provetta eppendorf "giusta". Dovrebbero esserci 2 membrane in questa provetta eppendorf. Passaggio 7: posizionare questo tubo nella scatola del ghiaccio. Passaggio 8: ripetere i passaggi 1-7 per l'altro occhio, ma inserire le membrane nella provetta eppendorf "sinistra". Passaggio 9: A questo punto dovrebbero essere presenti sia le provette eppendorf "destra" che "sinistra", ciascuna con 2 membrane al loro interno immerse in 1,5 ml di terreno RPMI. Mettili nella ghiacciaia.

   iv) Distacco delle cellule dalle membrane Utilizzando una punta da micropipetta da 10 ul, raschiare le cellule dalla membrana. Assicurarsi di raschiare il lato corretto della membrana (questo può essere fatto facendo riferimento alla direzione dei ganci della membrana). Questo viene fatto più facilmente fissando la membrana contro la parete del tubo della fiala e raschiandola via con un movimento simile a una molatura (la parete del tubo della fiala è il mortaio e la punta della micropipetta è come un pestello). Ripetere per l'altra membrana nello stesso tubo della fiala. Inoltre, ripeti gli stessi passaggi per l'altro occhio. Una volta completata la raschiatura delle cellule, posizionare le 2 provette eppendorf sul ghiaccio e consegnarle all'Aihua o Tanima (livello accademico 12) per l'analisi FAC nello stesso giorno.

7. Punteggio di colorazione corneale con fluoresceina