Oculaire oppervlakteziekte bij patiënten met chronische graft-versus-hostziekte (GVHD).

Droge ogen is een multifactoriële ziekte die veel voorkomt in de oogheelkundige praktijk. Veel voorkomende symptomen van droge ogen zijn oogirritatie, zwaar gevoel van de oogleden, wazig zien en lichtgevoeligheid (1). De wereldwijde prevalentie van droge ogen is over het algemeen hoog (2-4). In Azië kan droge ogen tot 22% van de volwassenen ouder dan 40 jaar in China (5) en Japan (3) treffen. Bij Aziatische patiënten ouder dan 65 jaar kan de prevalentie van droge ogen oplopen tot 80% als de diagnose is gebaseerd op abnormale traanstabiliteit, of tot 60% bij disfunctie van de klieren van Meibom (MGD), een belangrijke oorzaak van traaninstabiliteit ( 6).

De meeste patiënten met droge ogen kunnen met succes worden behandeld met smeermiddelen, punctale occlusie, oogdruppels met steroïden en/of ciclosporine. Sommige patiënten met ernstige droge ogen en waarschijnlijk onderliggende ziekten, bijvoorbeeld graft-versus-hostziekte (GVHD), die conventionele behandelingen hebben uitgeput, kunnen oplopen tot 10-20 gevallen per jaar en zijn moeilijk te behandelen. Deze patiënten en hun artsen staan ​​hulpeloos tegenover deze scenario's.

Hematopoëtische stamceltransplantatie (SCT) is gevestigd als een potentiële curatieve therapie voor hematologische maligniteiten (9). Het aantal SCT-ontvangers is de afgelopen 2 decennia wereldwijd exponentieel toegenomen. GVHD is de belangrijkste oorzaak van morbiditeit en mortaliteit bij patiënten die allogene SCT ondergaan (10).

Droge ogen geassocieerd met chronische GVHD is een van de belangrijkste late complicaties na allogene SCT; het heeft een aanzienlijke invloed op de levenskwaliteit van patiënten (11-13) en kan leiden tot blindheid (14). Het immunologische proces van droge ogen geassocieerd met chronische GVHD blijft grotendeels onbekend, maar wordt verondersteld traditionele alloreactiviteit te zijn voor ontvangende weefsels.

De onderzoekers stellen voor om samen te werken met het Singapore General Hospital, Department of Hematology om zich te concentreren op de klinische kenmerken en het immunologische profiel van de ontsteking van het oogoppervlak bij meer ernstige chronische GVHD-patiënten. De ernst van droge ogen is ernstiger bij chronische GVHD-patiënten bij SNEC, in vergelijking met idiopathische gevallen van droge ogen. Dit kan te wijten zijn aan verwijzingsbias, of kan verband houden met de systemische ziekte. Als zodanig zijn de onderzoekers van plan een pilotstudie uit te voeren om enkele oculaire kenmerken van niet-verwezen hematologiepatiënten met GVHD te definiëren. De onderzoekers stellen voor om 30 geschikte deelnemers met chronische GVHD te screenen en te werven. Uit te voeren tests omvatten oculaire beeldvorming (Oculus K5M), oculair immunologisch profiel (conjunctiva-immuuncellen) en oogoppervlakontsteking (MMP-9 traanmarker).

1 HYPOTHESE EN DOELSTELLINGEN

Deze studie heeft dus tot doel de ontsteking van het oogoppervlak van chronische GVHD-patiënten te profileren door conjunctivale cellen te onderzoeken en klinische beeldvorming voor conjunctivale roodheid en traanstabiliteit. Daarom verwachten de onderzoekers een toename van de ontstekingscelpopulatie in GVHD-conjunctivale monsters.

Specifieke doelen:

1. Om het oculaire immunologische profiel (conjunctivale immuuncellen) van patiënten met GVHD te bepalen en te correleren met de systemische status (behandeling).
2. Om te bepalen of objectieve metingen van traandisfunctie/ontsteking van het oogoppervlak abnormaal zijn bij GVHD-patiënten en correleren met de systemische status.

Uitkomsten:

• Symptomen van droge ogen (SPEED-vragenlijst)
• Scheurproductie
• Profiel van conjunctivale immuuncellen (aandeel van T-lymfocyten en andere immuuncellen)
• Klinische parameters voor het oogoppervlak (conjunctivale roodheid, niet-invasieve traanafbraaktijd, corneale fluoresceïnekleuring)

Doelen op lange termijn:

1. Vaststellen van criteria voor het screenen van cGVH-patiënten voor doorverwijzing naar oogheelkundig specialisten.
2. Om longitudinale uitkomsten te bepalen van cGVH-gevallen met droge ogen en effecten van systemische profylactische behandeling, evenals andere oculaire behandelingen zoals oogdruppels met plasmaferese.

1.1.1 Potentiële risico's De onderzoekers anticiperen op minimale risico's en ongemakken bij dit onderzoek.

• Het is mogelijk dat er enig ongemak optreedt tijdens het afnemen van conjunctivale cellen met behulp van het afdrukmembraan
• Wat licht ongemak van traanstripmeniscometrie
• Deelnemers kunnen lichte irritatie voelen wanneer de InflammaDry-testkit wordt toegediend, omdat er een zacht kussentje van absorberend materiaal op het onderste ooglid van de deelnemer moet worden geplaatst om tranen op te vangen.
• Stekend gevoel als gevolg van plaatselijke verdoving (Alcaine)

1.1.2 Potentiële voordelen Met een beter begrip van de aanwezigheid van verschillende ontstekingsmediatoren kunnen de onderzoekers meer inzicht krijgen in het complexe proces dat plaatsvindt bij chronische GVHD-patiënten.

2 ONDERZOEKSBEVOLKING 3.1 Noem het aantal en de aard van de in te schrijven proefpersonen. Dertig in aanmerking komende GVHD-patiënten zullen worden gescreend en gerekruteerd uit het Transplant Center in Block 7, Level 1, Singapore General Hospital - Department of Hematology.

3.2 Criteria voor werving en wervingsproces

1. Onderwerpen voldoen aan alle inclusiecriteria
2. Vrij van uitsluitingscriteria.

Toestemming zou worden gevraagd aan de behandelende artsen van SGH, afdeling Hematologie voordat proefpersonen worden gerekruteerd. Onderwerpen die in aanmerking komen, krijgen advies over het onderzoek. Als de proefpersoon geïnteresseerd is, zal geïnformeerde schriftelijke toestemming van alle deelnemers worden verkregen. Daarna gaat de SERI research optometrist verder met oogonderzoek in het SGH Transplant Centre.

4 STUDIEONTWERP

4.1.1 Studieprocedures

De examens worden afgenomen door leden van het SERI-studieteam. De lijst met vereiste examens wordt getoond:

1. Symptomen van droge ogen (SPEED-vragenlijst)
2. Niet-invasieve Tear Break-up Time (NIKBUT) - Oculus K5M
3. Conjunctivale roodheid - Oculus K5M
4. Tear Strip Meniscometry (SMTube), Schirmers-test
5. Scheur MMP-9 resultaat (Inflammadry)
6. Impressie Cytologie - met behulp van EyePrim conjunctivale membranen
7. Hoornvliesfluoresceïnekleuring - Oculus K5M

Details van procedures

1. Vragenlijst droge ogen Deelnemers wordt gevraagd een vragenlijst voor droge ogen te scoren om de symptomatische ernst van droge ogen en de mate van verstoring van de dagelijkse activiteiten gedurende de afgelopen twee weken te beoordelen.

   • SPEED-vragenlijst Bestaat uit 2 vragen over frequentie en ernst beoordeeld op een schaal van 0-3 op frequentie en cijfer 0-4 op ernst. Met de vragenlijst kan de patiënt een score geven van 0 wat nooit is en 3 wat altijd de frequentie is en 0 als geen probleem en 4 als onaanvaardbaar qua ernst.

2. Niet-invasieve traanbreektijd (NIBUT) De Oculus keratograaf 5M (Oculus, Wetzlar, Duitsland) zal worden gebruikt om de niet-invasieve traanbreektijd uit te voeren. De patiënt zit comfortabel voor het instrument en knippert vrijelijk terwijl hij zich op een doel direct voor hem fixeert. Zodra de patiënt klaar is, wordt de patiënt geïnstrueerd om twee keer te knipperen en niet te knipperen. Keratograph 5M is volledig geautomatiseerd en legt elke onderbreking of vervorming in het beeld vast en het tijdstip van de onderbreking wordt genoteerd. Voor elk oog worden drie metingen uitgevoerd om de gemiddelde waarde te krijgen. Het is mogelijk dat de traanfilm van deelnemers stabieler is, d.w.z. een langere traanopbreektijd.
3. Beeldvorming van conjunctivale roodheid met Oculus Keratography 5M
4. Tear Strip Meniscometry (SMTube) Haal de SMTube uit het steriele zakje. Houd het midden van SMTube vast. Raak het verfgebied niet aan. Dompel de punt van de SMTube gedurende 5 seconden onder in de laterale scheurmeniscus van het onderste ooglid van een oog. Neem extra voorzorgsmaatregelen om te voorkomen dat de tip het bindvlies van de patiënt raakt. Verwijder na 5 seconden de SMTube van de scheurmeniscus van het onderste ooglid. Meet de lengte van de blauwgekleurde kolom.
5. Tear MMP-9-resultaat (Inflammadry) De InflammaDry-test wordt uitgevoerd nadat meniscometrie van de traan is uitgevoerd, aangezien deze de MMP-9-niveaus (een ontstekingsmarker) in tranen beoordeelt en daarom niet wordt beïnvloed door reflextranen (15). Het vliesje van de teststrip wordt op meerdere plaatsen langs de binnenkant van het onderste ooglid gedept, de patiënt wordt gevraagd om te knipperen en de strip wordt vervolgens gedurende nog eens 5 seconden langs het onderste ooglidvlies van de neus geplaatst. Monteer het bemonsteringsvlies in het monsteroverdrachtvenster van de testcassette. Daarna wordt de absorberende tip 20 seconden ondergedompeld in de bufferoplossing. Verwijder de absorberende punt van het bufferflesje, plaats de beschermkap terug en leg de test gedurende 10 minuten plat op het horizontale oppervlak. Een enkele blauwe lijn geeft een negatief resultaat aan, terwijl het verschijnen van 2 lijnen (rood en blauw) een positief resultaat aangeeft.

6. Afdrukcytologie (met behulp van EyePrim-membranen)

   i) Bereiding van RPMI-oplossing Bereid in een steriele bioveiligheidskap 2 injectieflacons met Eppendorf-buisjes van 2 ml. Eén tube voor respectievelijk het rechteroog en het linkeroog. Vul de 2 buizen met 1,5 ml RPMI-oplossing. Breng daarna de buisjes over in een ijsbox met ijs en breng ze over naar het transplantatiecentrum in SGH, waar een afdruk zal worden gemaakt.

   ii) Anesthesie Stap 1: Informeer de deelnemer dat hij/zij een tijdelijk prikkelend gevoel kan ervaren. Vraag de deelnemer om zijn blik naar boven te richten. Druk op het onderste ooglid en plaats een druppel LA in de onderste palpebrale fornix. Doe dit voor beide ogen. Vraag de patiënt om minimaal 3 keer zachtjes te knipperen. Stap 2: Zodra het prikken afneemt, vraag je de deelnemer om zijn blik naar beneden te richten. Til het bovenste ooglid van de patiënt op en plaats een druppel LA op de bulbaire conjunctiva op het hoogst mogelijke punt. Doe dit voor beide ogen. Vraag de patiënt om minimaal 3 keer zachtjes te knipperen. Stap 3: Herhaal stap 2 nog een keer. De deelnemer zou op dit moment geen stekende sensaties van het oog moeten kunnen voelen.

   iii) Conjunctivale bemonstering Stap 1: Vraag de deelnemer om zijn/haar blik in de infero-temporele richting te richten. Hierdoor wordt de superieure nasale bulbaire conjunctiva blootgelegd voor afdruk. Stap 2: Breng het EyePRIM-membraan aan op het gebied. Stap 3: Zorg voor een goede hechting van het membraan met de conjunctiva. Doe dit door het EyePRIM-membraan naar links en rechts te bewegen. Stap 4: Verwijder het membraan van het bindvlies met een peelende beweging. Stap 5: Oefen meer kracht uit op het EyePRIM veermechanisme. Na een "klik" -geluid wordt het membraan uit de gadget geworpen. Plaats het membraan van het rechteroog in de "juiste" eppendorfbuis. Stap 6: Herhaal dit voor de superieure temporale bulbaire conjunctiva, deze keer richt u de blik van de deelnemer inferonasaal. Plaats dit membraan in de "juiste" eppendorfbuis. Er zouden 2 membranen in deze eppendorfbuis moeten zitten. Stap 7: Plaats deze tube in de doos met ijs. Stap 8: Herhaal stappen 1-7 voor het andere oog, maar plaats de membranen in de "linker" eppendorfbuis. Stap 9: Op dit punt moeten zowel "rechter" als "linker" eppendorf-buisjes zijn, elk met 2 membranen erin, ondergedompeld in 1,5 ml RPMI-medium. Plaats ze in de ijsbox.

   iv) Losmaken van cellen van membranen Schraap met behulp van een micropipetpunt van 10 µl de cellen van het membraan. Zorg ervoor dat u de juiste kant van het membraan schraapt (dit kan worden gedaan door te verwijzen naar de richting van de haken van het membraan). Dit gaat het gemakkelijkst door het membraan tegen de wand van de flaconbuis te drukken en het er met een schurende beweging af te schrapen (de wand van de flaconbuis is de vijzel en de punt van de micropipet is als een stamper). Herhaal dit voor het andere membraan in dezelfde flaconbuis. Herhaal dezelfde stappen ook voor het andere oog. Zodra het schrapen van de cellen is voltooid, plaatst u de 2 eppendorf-buizen op het ijs en overhandigt u deze aan de Aihua of Tanima (Academia Level 12) voor FAC-analyse op dezelfde dag.

7. Corneale fluoresceïnekleuringsscore