Maladie de la surface oculaire chez les patients atteints de maladie chronique du greffon contre l'hôte (GVHD)

La sécheresse oculaire est une maladie multifactorielle fréquemment rencontrée en pratique ophtalmologique. Les symptômes courants de sécheresse oculaire comprennent une irritation des yeux, une lourdeur des paupières, une vision floue et une sensibilité à la lumière (1). La prévalence mondiale de la sécheresse oculaire est généralement élevée (2-4). En Asie, la sécheresse oculaire peut toucher jusqu'à 22 % des adultes de plus de 40 ans en Chine (5) et au Japon (3). Chez les patients asiatiques âgés de plus de 65 ans, les taux de prévalence de la sécheresse oculaire peuvent atteindre 80 % si le diagnostic est basé sur une stabilité lacrymale anormale, ou atteindre 60 % sur un dysfonctionnement des glandes de Meibomius (MGD), une cause majeure d'instabilité lacrymale ( 6).

La plupart des patients atteints de sécheresse oculaire peuvent être pris en charge avec succès avec des lubrifiants, une occlusion des points lacrymaux, des collyres stéroïdiens et/ou de la cyclosporine. Cependant, certains patients souffrant de sécheresse oculaire sévère et de maladies sous-jacentes probables, par exemple la maladie du greffon contre l'hôte (GVHD), qui ont épuisé les traitements conventionnels, peuvent représenter 10 à 20 cas par an et sont difficiles à gérer. Ces patients et leurs médecins sont impuissants face à ces scénarios.

La greffe de cellules souches hématopoïétiques (SCT) a été établie comme une thérapie curative potentielle pour les hémopathies malignes (9). Le nombre de bénéficiaires du SCT a augmenté de façon exponentielle dans le monde au cours des 2 dernières décennies. La GVHD est la principale cause de morbidité et de mortalité chez les patients subissant une SCT allogénique (10).

La sécheresse oculaire associée à la GVHD chronique est l'une des principales complications tardives après GSC allogénique ; elle a un impact significatif sur la qualité de vie des patients (11-13) et peut conduire à la cécité (14). Le processus immunologique de la sécheresse oculaire associée à la GVHD chronique reste largement inconnu, mais on pense qu'il s'agit d'une alloréactivité traditionnelle aux tissus receveurs.

Les chercheurs proposent de collaborer avec le Singapore General Hospital, Department of Hematology, pour se concentrer sur les caractéristiques cliniques et le profil immunologique de l'inflammation de la surface oculaire chez les patients atteints de GVHD chronique plus sévère. La sévérité de la sécheresse oculaire est plus sévère chez les patients atteints de GVHD chronique au SNEC, par rapport aux cas idiopathiques de sécheresse oculaire. Cela peut être dû à un biais de référence ou peut être lié à la maladie systémique. En tant que tel, les chercheurs ont l'intention de faire une étude pilote pour définir certaines caractéristiques oculaires des patients en hématologie non référés atteints de GVHD. Les enquêteurs proposent de sélectionner et de recruter 30 participants appropriés atteints de GVHD chronique. Les tests à effectuer comprendront l'imagerie oculaire (Oculus K5M), le profil immunologique oculaire (cellules immunitaires de la conjonctive) et l'inflammation de la surface oculaire (marqueur de déchirure MMP-9).

1 HYPOTHÈSE ET OBJECTIFS

Cette étude vise donc à profiler l'inflammation de la surface oculaire des patients atteints de GVHD chronique en étudiant les cellules conjonctivales et l'imagerie clinique pour la rougeur conjonctivale et la stabilité des déchirures. Par conséquent, les chercheurs s'attendent à trouver une augmentation de la population de cellules inflammatoires dans les échantillons conjonctivaux de GVHD.

Objectifs spécifiques :

1. Déterminer le profil immunologique oculaire (cellules immunitaires conjonctivales) des patients atteints de GVHD et établir une corrélation avec l'état systémique (traitement).
2. Déterminer si les mesures objectives du dysfonctionnement lacrymal/inflammation de la surface oculaire sont anormales chez les patients atteints de GVHD et corrélées à l'état systémique.

Résultats :

• Symptômes de sécheresse oculaire (Questionnaire SPEED)
• Production de larmes
• Profil des cellules immunitaires conjonctivales (Proportion de lymphocytes T et autres cellules immunitaires)
• Paramètres cliniques de la surface oculaire (rougeur conjonctivale, temps de rupture non invasif des larmes, coloration cornéenne à la fluorescéine)

Objectifs à long terme :

1. Établir des critères de dépistage des patients atteints de GVHc à orienter vers des spécialistes en ophtalmologie.
2. Déterminer les résultats longitudinaux des cas de sécheresse oculaire liée à la cGVH et les effets du traitement prophylactique systémique, ainsi que d'autres traitements oculaires tels que les gouttes ophtalmiques de plasmaphérèse.

1.1.1 Risques potentiels Les enquêteurs anticipent un minimum de risque et d'inconfort impliqués dans cette étude.

• Il est possible qu'il y ait un léger inconfort lors du prélèvement de cellules conjonctivales à l'aide de la membrane d'empreinte
• Léger inconfort dû à la méniscométrie par bandelette lacrymale
• Les participants peuvent ressentir une légère irritation lors de l'administration du kit de test InflammaDry, car il nécessite de placer un tampon doux en matériau absorbant sur la paupière inférieure du participant pour recueillir les larmes.
• Sensation de picotement à la suite d'une anesthésie locale (Alcaine)

1.1.2 Avantages potentiels Grâce à une meilleure compréhension de la présence de divers médiateurs inflammatoires, les chercheurs peuvent mieux comprendre le processus complexe qui se déroule chez les patients atteints de GVHD chronique.

2 POPULATION DE L'ETUDE 3.1 Liste Le nombre et la nature des sujets à inscrire. Trente patients GVHD éligibles seront dépistés et recrutés au centre de transplantation situé au bloc 7, niveau 1, Hôpital général de Singapour - Département d'hématologie.

3.2 Critères de recrutement et processus de recrutement

1. Les sujets répondent à tous les critères d'inclusion
2. Sans critères d'exclusion.

L'autorisation serait demandée aux médecins traitants du SGH, Département d'hématologie, avant le recrutement des sujets. Les sujets éligibles seront conseillés sur l'étude. Si le sujet est intéressé, un consentement écrit éclairé sera obtenu de tous les participants. Après quoi, l'optométriste chercheur SERI procédera à l'examen oculaire au Centre de transplantation SGH.

4 CONCEPTION DE L'ÉTUDE

4.1.1 Procédures d'étude

Les examens seront effectués par des membres de l'équipe d'étude du SEFRI. La liste des examens requis est indiquée :

1. Symptômes de sécheresse oculaire (questionnaire SPEED)
2. Temps de rupture des larmes non invasif (NIKBUT) - Oculus K5M
3. Rougeur conjonctivale - Oculus K5M
4. Méniscométrie Tear Strip (SMTube), test de Schirmers
5. Résultat Tear MMP-9 (Inflammadry)
6. Cytologie d'impression - utilisant les membranes conjonctivales EyePrim
7. Coloration cornéenne à la fluorescéine - Oculus K5M

Détails des procédures

1. Questionnaire sur la sécheresse oculaire Les participants seront invités à noter le questionnaire sur la sécheresse oculaire afin d'évaluer la gravité symptomatique de la sécheresse oculaire et l'étendue de sa perturbation des activités quotidiennes au cours des deux dernières semaines.

   • Questionnaire SPEED Composé de 2 questions sur la fréquence et la sévérité graduées sur une échelle de 0 à 3 sur la fréquence et de 0 à 4 sur la sévérité. Le questionnaire permet au patient d'évaluer de 0 qui est jamais et 3 qui est tout le temps en fréquence et 0 comme aucun problème et 4 comme intolérable en gravité.

2. Temps de rupture des larmes non invasif (NIBUT) Le kératographe Oculus 5M (Oculus, Wetzlar, Allemagne) sera utilisé pour effectuer le temps de rupture des larmes non invasif. Le patient sera assis confortablement devant l'instrument et clignotera librement tout en se fixant sur une cible directement devant lui. Une fois que le patient est prêt, il lui sera demandé de cligner des yeux deux fois et de s'abstenir de cligner des yeux. Le kératographe 5M est entièrement automatisé et il capturera toute rupture ou distorsion de l'image et l'heure de la rupture sera notée. Trois lectures seront prises pour chaque œil pour obtenir la valeur moyenne. Il est possible que le film lacrymal des participants soit plus stable, c'est-à-dire un temps de rupture des larmes plus long.
3. Imagerie des rougeurs conjonctivales avec Oculus Keratography 5M
4. Tear Strip Meniscometry (SMTube) Retirer le SMTube de la pochette stérile. Maintenez le centre de SMTube. Ne touchez pas la zone de teinture. Immerger la pointe du SMTube dans le ménisque latéral de déchirure de la paupière inférieure d'un œil pendant 5 secondes. Prenez des précautions supplémentaires pour éviter que l'embout ne touche la conjonctive du patient. Après 5 secondes, retirez le SMTube du ménisque de déchirure de la paupière inférieure. Mesurez la longueur de la colonne colorée en bleu.
5. Résultat Tear MMP-9 (Inflammadry) Le test InflammaDry sera administré après la réalisation de la méniscométrie lacrymale, car il évalue les niveaux de MMP-9 (un marqueur inflammatoire) dans les larmes et n'est donc pas affecté par le larmoiement réflexe (15). La toison de la bandelette de test est tamponnée le long de la paroi interne de la paupière inférieure à plusieurs endroits, le patient est invité à cligner des yeux, et la bandelette repose ensuite le long de la conjonctivale palpébrale nasale inférieure pendant 5 secondes supplémentaires. Assemblez le non-tissé d'échantillonnage dans la fenêtre de transfert d'échantillon du corps de la cassette de test. Après quoi l'embout absorbant est immergé dans la solution tampon pendant 20 secondes. Retirez l'embout absorbant du flacon de tampon, replacez le capuchon protecteur et posez le test à plat sur la surface horizontale pendant 10 minutes. Une seule ligne bleue indique un résultat négatif, tandis que l'apparition de 2 lignes (rouge et bleue) indique un résultat positif.

6. Cytologie par empreinte (avec membranes EyePrim)

   i) Préparation de la solution RPMI Dans une hotte de sécurité biologique stérile, préparer 2 flacons de tubes Eppendorf de 2 ml. Un tube pour l'œil droit et l'œil gauche respectivement. Remplir les 2 tubes avec 1,5 ml de solution RPMI. Par la suite, transférez les tubes dans une glacière contenant de la glace et transférez-les au centre de transplantation situé au SGH où l'impression sera effectuée.

   ii) Anesthésie Étape 1 : Informez le participant qu'il peut ressentir une sensation de picotement transitoire. Demande au participant de diriger son regard vers le haut. Appuyez sur la paupière inférieure et placez une goutte de LA dans le fornix palpébral inférieur. Faites cela pour les deux yeux. Demander au patient de cligner doucement des yeux au moins 3 fois. Étape 2 : Une fois que le picotement s'estompe, demandez au participant de diriger son regard vers le bas. Surélever la paupière supérieure du patient et déposer une goutte d'AL sur la conjonctive bulbaire au point le plus supérieur possible. Faites cela pour les deux yeux. Demander au patient de cligner doucement des yeux au moins 3 fois. Étape 3 : Répétez l'étape 2 une fois de plus. Le participant ne doit pas être capable de ressentir des sensations de picotement de l'œil à ce stade.

   iii) Échantillonnage conjonctival Étape 1 : Demander au participant de diriger son regard dans la direction inféro-temporale. Cela expose la conjonctive bulbaire nasale supérieure pour l'impression. Étape 2 : Appliquez la membrane EyePRIM sur la zone. Étape 3 : S'assurer de la bonne apposition de la membrane avec la conjonctive. Pour ce faire, faites basculer la membrane EyePRIM vers la gauche et vers la droite. Étape 4 : Retirez la membrane de la conjonctive avec un mouvement de type peeling. Étape 5 : Exercez une plus grande force sur le mécanisme à ressort EyePRIM. Après un "clic", la membrane sera éjectée du gadget. Placez la membrane de l'œil droit dans le tube eppendorf "droit". Étape 6 : Répétez l'opération pour la conjonctive bulbaire temporale supérieure, cette fois en dirigeant le regard du participant de manière inféro-nasale. Placez cette membrane dans le tube eppendorf "droit". Il devrait y avoir 2 membranes dans ce tube Eppendorf. Étape 7 : Placez ce tube dans la boîte de glace. Étape 8 : Répétez les étapes 1 à 7 pour l'autre œil, mais placez les membranes dans le tube Eppendorf « gauche ». Étape 9 : À ce stade, vous devriez avoir à la fois des tubes Eppendorf "droit" et "gauche", chacun avec 2 membranes à l'intérieur immergées dans 1,5 ml de milieu RPMI. Placez-les dans la glacière.

   iv) Détachement des cellules des membranes À l'aide d'une pointe de micropipette de 10 ul, grattez les cellules de la membrane. Assurez-vous de gratter le bon côté de la membrane (ceci peut être fait en vous référant au sens des crochets de la membrane). Cela se fait plus facilement en épinglant la membrane contre la paroi du tube du flacon et en la grattant avec un mouvement semblable à un broyage (la paroi du tube du flacon est le mortier et la pointe de la micropipette est comme un pilon). Répétez l'opération pour l'autre membrane dans le même tube de flacon. Répétez également les mêmes étapes pour l'autre œil. Une fois le raclage des cellules terminé, placez les 2 tubes Eppendorf sur la glace et remettez-les à l'Aihua ou au Tanima (Academia Level 12) pour l'analyse des FAC le même jour.

7. Score de coloration cornéenne à la fluorescéine