Okulær overfladesygdom hos patienter med kronisk graft-versus-værtssygdom (GVHD)

Tørre øjne er en multifaktoriel sygdom, der ofte ses i oftalmologisk praksis. Almindelige symptomer på tørre øjne omfatter øjenirritation, tyngde af øjenlågene, sløret syn og lysfølsomhed (1). Den verdensomspændende forekomst af tørre øjne er generelt høj (2-4). I Asien kan tørre øjne påvirke op til 22 % af voksne over 40 år i Kina (5) og Japan (3). Hos asiatiske patienter over 65 år kan prævalensraten for tørre øjne være så høj som 80 %, hvis diagnosen er baseret på unormal tårestabilitet, eller så høj som 60 % på meibomisk kirteldysfunktion (MGD), en væsentlig årsag til tåreinstabilitet ( 6).

De fleste patienter med tørre øjne kan med succes håndteres med smøremidler, punktal okklusion, steroid og/eller cyclosporin øjendråber. Nogle patienter med alvorlige tørre øjne og sandsynlige underliggende sygdomme, f.eks. Graft-Versus-Host Disease (GVHD), som har udmattet konventionelle behandlinger, kan dog udgøre 10-20 tilfælde om året og er vanskelige at håndtere. Disse patienter og deres læger er hjælpeløse, når de står over for disse scenarier.

Hæmatopoietisk stamcelletransplantation (SCT) er blevet etableret som en potentiel helbredende terapi for hæmatologiske maligniteter (9). Antallet af SCT-modtagere er steget eksponentielt på verdensplan i løbet af de sidste 2 årtier. GVHD er den vigtigste årsag til morbiditet og dødelighed hos patienter, der gennemgår allogen SCT (10).

Tørre øjne forbundet med kronisk GVHD er en af ​​de største sene komplikationer efter allogen SCT; det har en væsentlig indflydelse på patienternes livskvalitet (11-13) og kan føre til blindhed (14). Den immunologiske proces med tørre øjne forbundet med kronisk GVHD forbliver stort set ukendt, men menes at være traditionel alloreaktivitet til modtagervæv.

Efterforskerne foreslår at samarbejde med Singapore General Hospital, Department of Hematology for at fokusere på de kliniske karakteristika og immunologiske profil af den okulære overfladebetændelse hos mere alvorlige kroniske GVHD-patienter. Sværhedsgraden af ​​tørre øjne er mere alvorlig hos patienter med kronisk GVHD på SNEC sammenlignet med idiopatiske tilfælde af tørre øjne. Dette kan skyldes henvisningsbias eller kan være relateret til den systemiske sygdom. Som sådan har efterforskerne til hensigt at lave en pilotundersøgelse for at definere nogle okulære karakteristika for ikke-henviste hæmatologiske patienter med GVHD. Efterforskerne foreslår at screene og rekruttere 30 egnede deltagere, som har kronisk GVHD. Tests, der skal udføres, vil omfatte okulær billeddannelse (Oculus K5M), okulær immunologisk profil (conjunctiva immunceller) og okulær overfladebetændelse (MMP-9 tåremarkør).

1 HYPOTESE OG MÅL

Denne undersøgelse har således til formål at profilere den okulære overfladebetændelse hos kroniske GVHD-patienter ved at undersøge konjunktivale celler og klinisk billeddannelse for konjunktival rødme og tårestabilitet. Derfor forventer efterforskerne at finde en øget inflammatorisk cellepopulation i GVHD konjunktivale prøver.

Specifikke mål:

1. At bestemme den okulære immunologiske profil (konjunktivale immunceller) for patienter med GVHD og korrelere med systemisk status (behandling).
2. For at bestemme, om objektive mål for tårefysfunktion/okulær overfladebetændelse er unormale hos GVHD-patienter og korrelerer med systemisk status.

Resultater:

• Symptomer på tørre øjne (SPEED-spørgeskema)
• Tåreproduktion
• Konjunktival immuncelleprofil (andel af T-lymfocytter og andre immunceller)
• Kliniske parametre for øjens overflade (konjunktival rødme, ikke-invasiv tårebrudtid, hornhindefluoresceinfarvning)

Langsigtede mål:

1. At etablere kriterier for screening af cGVH-patienter med henblik på henvisning til øjenlæger.
2. At bestemme longitudinelle resultater af tilfælde af cGVH-tørre øjne og virkninger af systemisk profylaktisk behandling samt anden okulær behandling såsom plasmaferese øjendråber.

1.1.1 Potentielle risici Efterforskerne vil forudse minimal risiko og ubehag involveret i denne undersøgelse.

• Det er muligt, at der kan være lidt ubehag under prøvetagning af konjunktivalceller ved hjælp af aftryksmembranen
• Noget let ubehag fra tårestrimmelmeniskometri
• Deltagerne kan føle let irritation, når InflammaDry-testsættet administreres, da det kræver at placere en blød pude lavet af absorberende materiale på deltagerens nederste låg for at samle tårer.
• Stikkende fornemmelse som følge af lokalbedøvelse (Alcaine)

1.1.2 Potentielle fordele Med større forståelse for tilstedeværelsen af ​​forskellige inflammatoriske mediatorer kan efterforskerne få yderligere indsigt i den komplekse proces, der finder sted hos kroniske GVHD-patienter.

2 STUDIEBEFOLKNING 3.1 Liste over antallet og arten af ​​emner, der skal tilmeldes. Tredive kvalificerede GVHD-patienter vil blive screenet og rekrutteret fra transplantationscenteret i blok 7, niveau 1, Singapore General Hospital- Department of Haematology.

3.2 Kriterier for rekruttering og rekrutteringsproces

1. Emner opfylder alle inklusionskriterier
2. Klar for eksklusionskriterier.

Der skal søges tilladelse fra de behandlende læger fra SGH, Hæmatologisk Afdeling, før forsøgspersoner rekrutteres. Støtteberettigede forsøgspersoner vil blive vejledt om undersøgelsen. Hvis emnet er interesseret, vil der blive indhentet informeret skriftligt samtykke fra alle deltagere. Hvorefter SERI forskningsoptometrist går videre med øjenundersøgelse på SGH Transplantationscenter.

4 STUDIEDESIGN

4.1.1 Undersøgelsesprocedurer

Undersøgelserne vil blive udført af SERI-studieteamets medlemmer. Listen over obligatoriske prøver er vist:

1. Symptomer på tørre øjne (SPEED-spørgeskema)
2. Ikke-invasiv tårebrudstid (NIKBUT)- Oculus K5M
3. Konjunktival rødme- Oculus K5M
4. Tear Strip Meniscometry (SMTube), Schirmers test
5. Riv MMP-9 resultat (betændelse)
6. Impression Cytology-brug af EyePrim konjunktivale membraner
7. Hornhindefluoresceinfarvning- Oculus K5M

Detaljer om procedurer

1. Spørgeskema til tørre øjne Deltagerne vil blive bedt om at score tørre øjne spørgeskema for at vurdere den symptomatiske sværhedsgrad af tørre øjne og omfanget af dets forstyrrelse af daglige aktiviteter i de sidste to uger.

   • SPEED-spørgeskema Består af 2 spørgsmål om hyppighed og sværhedsgrad bedømt på en skala fra 0-3 for hyppighed og karakter 0-4 for sværhedsgrad. Spørgeskemaet giver patienten mulighed for at vurdere fra 0, som er aldrig og 3, som er hele tiden i frekvens og 0 som intet problem og 4 som utålelig i sværhedsgrad.

2. Non-invasive tear break-up time (NIBUT) Oculus keratographer 5M (Oculus, Wetzlar, Tyskland) vil blive brugt til at udføre den ikke-invasive tåre break-up tid. Patienten vil sidde komfortabelt foran instrumentet og blinke frit, mens han fikserer på et mål lige foran. Når patienten er klar, vil patienten blive bedt om at blinke to gange og undlade at blinke. Keratograph 5M er fuldautomatisk, og den vil fange enhver pause eller forvrængning i billedet, og tidspunktet for pausen vil blive noteret. Der foretages tre aflæsninger for hvert øje for at få gennemsnitsværdien. Det er muligt, at deltagernes tårefilm er mere stabil, dvs. øget tårebrudstid.
3. Billeddannelse af konjunktival rødme med Oculus Keratography 5M
4. Tear Strip Meniscometry (SMTube) Fjern SMTube fra den sterile pose. Hold midten af ​​SMtube. Rør ikke ved farveområdet. Nedsænk spidsen af ​​SMTuben til den laterale, nedre øjenlågs tåremenisk i et øje i 5 sekunder. Tag ekstra forholdsregler for at forhindre spidsen i at røre patientens bindehinde. Efter 5 sekunder fjernes SMTuben fra rivemenisken i det nederste låg. Mål længden af ​​søjlen farvet blå i farven.
5. Tear MMP-9-resultat (Inflammadry) InflammaDry-testen vil blive administreret efter at tåremeniskometri er udført, da den vurderer MMP-9-niveauerne (en inflammatorisk markør) i tårer og derfor ikke påvirkes af refleksrivning (15). Teststrimlens fleece duppes langs indersiden af ​​det nedre øjenlåg flere steder, patienten bliver bedt om at blinke, og strimlen hviler derefter langs den inferior nasale palpebrale konjunktival i yderligere 5 sekunder. Saml prøveudtagningsfleece i prøveoverførselsvinduet på testkassettehuset. Hvorefter den absorberende spids nedsænkes i bufferopløsningen i 20 sekunder. Fjern den absorberende spids fra bufferhætteglasset, sæt beskyttelseshætten på igen, og læg testen fladt på den vandrette overflade i 10 minutter. En enkelt blå linje indikerer et negativt resultat, mens udseendet af 2 linjer (rød og blå) indikerer et positivt resultat.

6. Impression Cytology (ved hjælp af EyePrim-membraner)

   i) Klargøring af RPMI-opløsning Forbered 2 hætteglas med 2 ml Eppendorf-rør i en steril biosikkerhedshætte. Et rør til henholdsvis højre øje og venstre øje. Fyld de 2 rør med 1,5 ml RPMI-opløsning. Derefter overføres rør i isboks indeholdende is og overføres til transplantationscentret ved SGH, hvor aftryk vil blive foretaget.

   ii) Anæstesi Trin 1: Informer deltageren om, at han/hun kan opleve en forbigående stikkende fornemmelse. Anmod om, at deltageren retter blikket opad. Tryk det nedre øjenlåg ned og anbring en dråbe LA i den nedre palpebrale fornix. Gør dette for begge øjne. Anmod om, at patienten blinker blidt i mindst 3 gange. Trin 2: Når svien fortager sig, anmod deltageren om at rette blikket nedad. Løft patientens øvre øjenlåg og anbring en dråbe LA på bulbar bindehinde på det mest overordnede punkt som muligt. Gør dette for begge øjne. Anmod om, at patienten blinker blidt i mindst 3 gange. Trin 3: Gentag trin 2 endnu en gang. Deltageren bør ikke kunne mærke nogen stikkende fornemmelser i øjet på dette tidspunkt.

   iii) Konjunktival prøvetagning Trin 1: Bed deltageren om at rette sit blik i den infero-temporale retning. Dette afslører den overlegne nasale bulbar bindehinde for indtryk. Trin 2: Påfør EyePRIM-membranen på området. Trin 3: Sørg for god apposition af membranen med bindehinden. Gør dette ved at vippe EyePRIM-membranen til venstre og højre. Trin 4: Fjern membranen fra bindehinden med en peeling-lignende bevægelse. Trin 5: Udøv større kraft på EyePRIM-fjedermekanismen. Efter en "klik" lyd vil membranen blive skubbet ud af gadgetten. Placer membranen fra højre øje ind i det "rigtige" eppendorfrør. Trin 6: Gentag for den overordnede temporale bulbare bindehinde, denne gang retter deltagerens blik infero-nasalt. Placer denne membran i det "rigtige" Eppendorf-rør. Der skal være 2 membraner i dette eppendorfrør. Trin 7: Placer dette rør i iskassen. Trin 8: Gentag trin 1-7 for det andet øje, men placer membranerne i det "venstre" eppendorfrør. Trin 9: På dette tidspunkt skal der have både "højre" og "venstre" eppendorf-rør, hver med 2 membraner indeni dem nedsænket i 1,5 ml RPMI-medium. Læg dem i isboksen.

   iv) Frigørelse af celler fra membraner Brug en 10 ul mikropipettespids til at skrabe cellerne af membranen. Sørg for at skrabe den korrekte side af membranen (dette kan gøres ved at henvise til retningen af ​​krogene på membranen). Dette gøres nemmest ved at fastgøre membranen mod væggen af ​​hætteglasslangen og skrabe den af ​​med en slibelignende bevægelse (væggen af ​​hætteglasslangen er morteren og mikropipettespidsen er som en støder). Gentag for den anden membran i samme hætteglasrør. Gentag også de samme trin for det andet øje. Når skrabning af celler er afsluttet, placeres de 2 eppendorf-rør på isen og afleveres til Aihua eller Tanima (Academia Level 12) til FACs-analyse samme dag.

7. Hornhindefluoresceinfarvningsscore