Choroba powierzchni oka u pacjentów z przewlekłą chorobą przeszczep przeciw gospodarzowi (GVHD).

Zespół suchego oka jest chorobą wieloczynnikową, często spotykaną w praktyce okulistycznej. Typowe objawy suchego oka obejmują podrażnienie oka, uczucie ciężkości powiek, niewyraźne widzenie i wrażliwość na światło (1). Częstość występowania zespołu suchego oka na świecie jest na ogół wysoka (2-4). W Azji zespół suchego oka może dotyczyć do 22% dorosłych powyżej 40 roku życia w Chinach (5) i Japonii (3). U Azjatów w wieku powyżej 65 lat częstość występowania zespołu suchego oka może sięgać nawet 80%, jeśli diagnoza opiera się na nieprawidłowej stabilności łez, lub nawet 60% w przypadku dysfunkcji gruczołów Meiboma (MGD), głównej przyczyny niestabilności łez. 6).

Większość pacjentów z zespołem suchego oka może być skutecznie leczona za pomocą lubrykantów, okluzji punktów, sterydowych i/lub kropli do oczu z cyklosporyną. Jednak u niektórych pacjentów z ciężkim zespołem suchego oka i prawdopodobnymi chorobami podstawowymi, na przykład chorobą przeszczep przeciw gospodarzowi (GVHD), którzy wyczerpali konwencjonalne metody leczenia, może wystąpić 10-20 przypadków rocznie i są oni trudni w leczeniu. Ci pacjenci i ich lekarze są bezradni w obliczu takich scenariuszy.

Przeszczep hematopoetycznych komórek macierzystych (SCT) został uznany za potencjalną terapię leczniczą nowotworów hematologicznych (9). Liczba odbiorców SCT wzrosła wykładniczo na całym świecie w ciągu ostatnich 2 dekad. GVHD jest główną przyczyną zachorowalności i śmiertelności u pacjentów poddawanych allogenicznemu SCT (10).

Suche oko związane z przewlekłą GVHD jest jednym z głównych późnych powikłań po allogenicznej SCT; ma istotny wpływ na jakość życia pacjentów (11-13) i może prowadzić do ślepoty (14). Proces immunologiczny suchego oka związany z przewlekłą GVHD pozostaje w dużej mierze nieznany, ale uważa się, że jest to tradycyjna alloreaktywność wobec tkanek biorcy.

Badacze proponują współpracę z Singapore General Hospital, Department of Hematology, aby skupić się na charakterystyce klinicznej i profilu immunologicznym zapalenia powierzchni oka u pacjentów z cięższą przewlekłą GVHD. Nasilenie suchego oka jest cięższe u pacjentów z przewlekłą GVHD w SNEC, w porównaniu z idiopatycznymi przypadkami suchego oka. Może to wynikać z błędu skierowania lub może być związane z chorobą ogólnoustrojową. W związku z tym badacze zamierzają przeprowadzić badanie pilotażowe w celu określenia niektórych cech ocznych niekierowanych pacjentów hematologicznych z GVHD. Badacze proponują przeszukanie i rekrutację 30 odpowiednich uczestników z przewlekłą GVHD. Testy, które zostaną wykonane, będą obejmowały obrazowanie oka (Oculus K5M), profil immunologiczny oka (komórki odpornościowe spojówki) oraz zapalenie powierzchni oka (marker łez MMP-9).

1 HIPOTEZA I CELE

Badanie to ma zatem na celu profilowanie zapalenia powierzchni oka u pacjentów z przewlekłą GVHD poprzez badanie komórek spojówki i obrazowanie kliniczne pod kątem zaczerwienienia spojówki i stabilności łez. W związku z tym badacze spodziewają się znaleźć zwiększoną populację komórek zapalnych w próbkach spojówki GVHD.

Cele szczegółowe:

1. Aby określić profil immunologiczny oka (komórki odpornościowe spojówki) pacjentów z GVHD i skorelować ze stanem ogólnoustrojowym (leczenie).
2. Aby określić, czy obiektywne pomiary dysfunkcji łez / zapalenia powierzchni oka są nieprawidłowe u pacjentów z GVHD i korelują ze stanem ogólnoustrojowym.

Wyniki:

• Objawy suchego oka (kwestionariusz SPEED)
• Produkcja łez
• Profil komórek odpornościowych spojówki (Proporcja limfocytów T i innych komórek odpornościowych)
• Parametry kliniczne powierzchni oka (zaczerwienienie spojówki, nieinwazyjny czas przerwania łez, barwienie fluoresceiną rogówki)

Cele długoterminowe:

1. Ustalenie kryteriów badań przesiewowych pacjentów z cGVH w celu skierowania do specjalistów okulistów.
2. Określenie długoterminowych wyników przypadków suchego oka cGVH oraz skutków ogólnoustrojowego leczenia profilaktycznego, jak również innego leczenia oczu, takiego jak krople do oczu z plazmaferezy.

1.1.1 Potencjalne ryzyko Badacze przewidują minimalne ryzyko i dyskomfort związany z tym badaniem.

• Możliwe, że podczas pobierania próbek komórek spojówki za pomocą membrany wyciskowej może wystąpić lekki dyskomfort
• Niewielki dyskomfort spowodowany meniskometrią paska łez
• Uczestnicy mogą odczuwać lekką irytację podczas podawania zestawu testowego InflammaDry, ponieważ wymaga to nałożenia na dolną powiekę uczestnika miękkiej podkładki z materiału chłonnego w celu zebrania łez.
• Uczucie pieczenia w wyniku znieczulenia miejscowego (Alcaine)

1.1.2 Potencjalne korzyści Dzięki lepszemu zrozumieniu obecności różnych mediatorów stanu zapalnego badacze mogą uzyskać głębszy wgląd w złożony proces zachodzący u pacjentów z przewlekłą GVHD.

2 BADANA POPULACJA 3.1 Wypisz liczbę i rodzaj przedmiotów, które mają zostać zapisane. Trzydziestu kwalifikujących się pacjentów z GVHD zostanie poddanych badaniu przesiewowemu i zrekrutowaniu z Centrum Transplantacji znajdującego się w bloku 7, poziom 1, Singapore General Hospital – Department of Hematology.

3.2 Kryteria Rekrutacji i Proces Rekrutacji

1. Przedmioty spełniają wszystkie kryteria włączenia
2. Wyczyść kryteria wykluczenia.

Przed rekrutacją pacjentów uzyskano by zgodę lekarzy prowadzących z Katedry Hematologii SGH. Kwalifikujące się osoby otrzymają porady dotyczące badania. Jeśli podmiot jest zainteresowany, od wszystkich uczestników zostanie uzyskana świadoma pisemna zgoda. Następnie optometrysta badawczy SERI przystąpi do badania okulistycznego w Centrum Transplantacji SGH.

4 PROJEKT STUDIUM

4.1.1 Procedury badawcze

Egzaminy zostaną przeprowadzone przez członków zespołu badawczego SERI. Lista wymaganych badań jest przedstawiona:

1. Objawy suchego oka (kwestionariusz SPEED)
2. Nieinwazyjny czas przerywania łez (NIKBUT) — Oculus K5M
3. Zaczerwienienie spojówek – Oculus K5M
4. Meniskometria paska łzowego (SMTube), test Schirmersa
5. Wynik łzy MMP-9 (Inflammadry)
6. Cytologia wyciskowa - z użyciem błon spojówkowych EyePrim
7. Barwienie rogówki fluoresceiną – Oculus K5M

Szczegóły procedur

1. Kwestionariusz suchego oka Uczestnicy zostaną poproszeni o wypełnienie kwestionariusza suchego oka w celu oceny nasilenia objawów suchego oka i stopnia zakłócenia codziennych czynności w ciągu ostatnich dwóch tygodni.

   • Kwestionariusz SZYBKOŚCI Składa się z 2 pytań dotyczących częstotliwości i dotkliwości ocenianych w skali od 0 do 3 pod względem częstości i od 0 do 4 pod względem dotkliwości. Kwestionariusz pozwala pacjentowi ocenić od 0, co oznacza, że ​​nigdy, do 3, które występuje cały czas pod względem częstości, od 0, że nie ma problemu, a do 4, że nasilenie jest nie do zniesienia.

2. Non Invasive Tear Break-up Time (NIBUT) Oculus keratograf 5M (Oculus, Wetzlar, Niemcy) zostanie wykorzystany do przeprowadzenia nieinwazyjnego pomiaru czasu przerwania łez. Pacjent usiądzie wygodnie przed instrumentem i swobodnie mruga, skupiając się na celu znajdującym się bezpośrednio przed nim. Gdy pacjent będzie gotowy, zostanie poinstruowany, aby zamrugał dwukrotnie i powstrzymał się od mrugania. Keratograf 5M jest w pełni zautomatyzowany i wychwyci każdą przerwę lub zniekształcenie obrazu, a czas wystąpienia przerwy zostanie odnotowany. Dla każdego oka zostaną wykonane trzy odczyty, aby uzyskać średnią wartość. Możliwe, że film łzowy uczestników jest bardziej stabilny, tj. Wydłużony czas przerwania łez.
3. Obrazowanie zaczerwienienia spojówek za pomocą Oculus Keratography 5M
4. Meniskometria paska łzowego (SMTube) Wyjąć SMTube ze sterylnego woreczka. Przytrzymaj środek SMTube. Nie dotykaj obszaru farbowania. Zanurzyć końcówkę SMTube w bocznej dolnej powiece menisku łzowego oka na 5 sekund. Należy zachować szczególną ostrożność, aby końcówka nie dotknęła spojówki pacjenta. Po 5 sekundach wyjmij SMTube z menisku łzowego dolnej powieki. Zmierz długość kolumny zabarwionej na niebiesko.
5. Wynik MMP-9 łez (Inflammadry) Test InflammaDry zostanie przeprowadzony po wykonaniu meniskometrii łez, ponieważ ocenia poziom MMP-9 (marker stanu zapalnego) we łzach, a zatem nie ma na niego wpływu odruchowe łzawienie (15). Włóknina paska testowego jest przecierana wzdłuż wewnętrznej wyściółki dolnej powieki w wielu miejscach, pacjent jest proszony o mruganie, a następnie pasek spoczywa wzdłuż dolnej spojówki powiekowej nosa przez kolejne 5 sekund. Zamontować włókninę do pobierania próbek w okienku przenoszenia próbki w korpusie kasety testowej. Następnie końcówkę chłonną zanurza się w roztworze buforowym na 20 sekund. Wyjmij końcówkę chłonną z fiolki z buforem, załóż nasadkę ochronną i połóż test płasko na poziomej powierzchni na 10 minut. Pojedyncza niebieska linia oznacza wynik ujemny, natomiast pojawienie się 2 linii (czerwonej i niebieskiej) wskazuje na wynik pozytywny.

6. Cytologia wyciskowa (przy użyciu membran EyePrim)

   i) Przygotowanie roztworu RPMI W sterylnym kapturze bezpieczeństwa biologicznego przygotuj 2 fiolki z probówkami Eppendorfa o pojemności 2 ml. Jedna tuba odpowiednio dla prawego i lewego oka. Napełnij 2 probówki 1,5 ml roztworu RPMI. Następnie probówki przenieść do pojemnika na lód z lodem i przenieść do Centrum Transplantacji mieszczącego się w SGH, gdzie zostanie pobrany wycisk.

   ii) Znieczulenie Krok 1: Poinformuj uczestnika, że ​​może odczuwać przejściowe pieczenie. Poproś uczestnika o skierowanie wzroku w górę. Wciśnij dolną powiekę i umieść jedną kroplę LA w dolnym sklepieniu powieki. Zrób to dla obu oczu. Poproś pacjenta, aby delikatnie zamrugał co najmniej 3 razy. Krok 2: Gdy pieczenie ustąpi, poproś uczestnika o skierowanie wzroku w dół. Unieść górną powiekę pacjenta i umieścić kroplę LA na spojówce gałkowej w najwyższym możliwym punkcie. Zrób to dla obu oczu. Poproś pacjenta, aby delikatnie zamrugał co najmniej 3 razy. Krok 3: Powtórz krok 2 jeszcze raz. W tym momencie uczestnik nie powinien odczuwać pieczenia w oku.

   iii) Pobieranie próbek spojówki Krok 1: Poproś uczestnika o skierowanie wzroku w kierunku dolno-skroniowym. To odsłania górną spojówkę opuszkową nosa w celu pobrania wycisku. Krok 2: Zastosuj membranę EyePRIM do obszaru. Krok 3: Zapewnić dobre przyleganie błony do spojówki. Zrób to, kołysząc membraną EyePRIM w lewo iw prawo. Krok 4: Usuń membranę ze spojówki ruchem przypominającym peeling. Krok 5: Wywieraj większą siłę na mechanizm sprężynowy EyePRIM. Po dźwięku „kliknięcia” membrana zostanie wysunięta z gadżetu. Umieść membranę z prawego oka w „prawej” probówce Eppendorfa. Krok 6: Powtórz dla spojówki opuszkowej górnej skroniowej, tym razem kierując wzrok badanego do dołu. Umieść tę membranę w „prawej” probówce Eppendorfa. W tej probówce Eppendorfa powinny znajdować się 2 membrany. Krok 7: Umieść tę rurkę w pudełku z lodem. Krok 8: Powtórz kroki 1-7 dla drugiego oka, ale umieść membrany w „lewej” probówce Eppendorfa. Krok 9: W tym momencie powinny być zarówno „prawe”, jak i „lewe” probówki Eppendorfa, każda z 2 membranami w środku, zanurzone w 1,5 ml pożywki RPMI. Umieść je w pojemniku na lód.

   iv) Oddzielenie komórek od błon Za pomocą końcówki do mikropipety 10 ul zeskrobać komórki z błony. Upewnij się, że zeskrobujesz właściwą stronę membrany (można to zrobić, odnosząc się do kierunku haczyków membrany). Najłatwiej to zrobić, przyciskając membranę do ścianki probówki fiolki i zeskrobując ją ruchem przypominającym tarcie (ściana probówki fiolki jest moździerzem, a końcówka mikropipety przypomina tłuczek). Powtórzyć dla drugiej membrany w tej samej fiolce. Powtórz te same czynności dla drugiego oka. Po zakończeniu zeskrobywania komórek umieść 2 probówki Eppendorfa na lodzie i przekaż je Aihua lub Tanima (Academia Level 12) do analizy FAC tego samego dnia.

7. Wynik barwienia fluoresceiną rogówki