Соотношения экспрессии генов агентов, блокирующих TNF и IL23, в исследовании Synovium_(TIGERS) при псориатическом артрите (TIGERS)

КРАТКИЙ ОБЗОР ИССЛЕДОВАНИЯ 1.1 Обоснование Псориатический артрит (ПсА) представляет собой хроническое воспалительное заболевание, ведущее к нарушению функции, снижению качества жизни, сопутствующим заболеваниям и повышению смертности. К счастью, расширение знаний о механизмах заболевания послужило катализатором быстрой разработки эффективных таргетных методов лечения этого заболевания. ПсА — клинически гетерогенное заболевание. Связи между клиническими проявлениями, активностью заболевания, тяжестью заболевания и энтезо-синовиальными молекулярными паттернами до сих пор не изучены. Кроме того, хотя в настоящее время доступно множество методов лечения, нацеленных на различные молекулы или цитокины, клиницисты все еще сталкиваются с трудностями при выборе лечения из-за отсутствия надежных маркеров, улучшающих стратификацию пациентов. В настоящем проекте мы хотим воспользоваться нашим опытом в этой области, чтобы сравнить глобальные молекулярные профили с повышенной или пониженной регуляцией при синовите у пациентов с ПсА, устойчивых к обычным синтетическим противоревматическим препаратам, модифицирующим болезнь (csDMARD), до и после назначение таргетной терапии для выявления молекулярных маркеров, связанных с реакцией на терапию. Это может позволить нам двигаться дальше в сторону точной медицины.

1.2 Цель исследования. Мы намерены оценить глобальные транскриптомные эффекты устекинумаба (блокатора ИЛ-12/ИЛ-23/р40) и гуселкумаба (блокатора ИЛ-23/р19) в синовиальных биоптатах пациентов с псБМАРП, не подвергавшихся биологическому лечению. , полученные до и через 24 недели после начала терапии. Параллельно будут получены синовиальные биопсии до и после начала приема адалимумаба (широко используемого блокатора TNFα) для оценки различных молекулярных путей, на которые влияют различные препараты. Для реализации этого проекта будет использоваться платформа Affymetrix (чипы GeneChip HGU133 Plus2.0). Мы и другие убедительно продемонстрировали силу этого аналитического подхода в идентификации синовиальных путей, связанных с активностью заболевания и реакцией на терапию в прошлом (что привело к разработке коммерческого диагностического и тераностического набора). Тем не менее, материал, собранный в ходе исследования, предоставит уникальную возможность провести более исследовательскую процедуру RNASeq для отдельных клеток на наших образцах, тем самым потенциально раскрывая молекулярные эффекты терапии в определенных клеточных популяциях. Выявление синовиальных эффектов этих методов лечения псориатического артрита будет шагом вперед в понимании не только механизма действия препарата на очаг воспаления, но и в определении молекулярных паттернов, связанных с хорошим ответом на терапию. Основное преимущество нашего подхода по сравнению с другими исследованиями биомаркеров заключается в том, что мы используем синовиальный материал как таковой, а не периферическую кровь, которая является более удаленной по отношению к клеточным мишеням препарата локализацией. Этот проект использует наш большой опыт в области молекулярного профилирования синовиальных биопсий и оценки реакции на биологические агенты. Ключом к успеху нашего трансляционного подхода является объединение надежных молекулярных методов с хорошо подтвержденной клинической оценкой активности заболевания и ответа на терапию с использованием набора клинических, биологических и визуализационных методов.

1.3 Дизайн исследования Двухцентровое 24-недельное открытое рандомизированное исследование с участием пациентов с клинически активным периферическим ПсА, получающих лечение соответствующими препаратами. Синовиальные биопсии будут получены у пациентов до и после 24 недель лечения различными препаратами.

1.4 Исследуемая популяция DMARD-резистентные, биологически наивные пациенты с диагнозом псориатического артрита в соответствии с критериями CASPAR и по крайней мере с одним опухшим суставом (большим или малым суставом), которые планируют лечение одним из целевых препаратов. Всего будет включено 36 пациентов. Пациенты будут рандомизированы в соотношении 1:1:1 между: Группа 1 (n=12): устекинумаб 45 мг (или 90 мг для пациентов > 100 кг) подкожно в начале исследования (Н0), через 4 недели (Н4) и каждые 12 недель. до 24 недели (т.е. W0, W4 и W16). Группа 2 (n=12): гуселкумаб 100 мг подкожно (независимо от массы тела пациента) на 0-й и 4-й неделях, затем поддерживающая доза каждые 8 ​​недель до 24-й недели (т.е. П0, П4, П12 и П20). Группа 3 (n=12): адалимумаб 40 мг (независимо от массы тела пациента), подкожно через неделю, начиная с исходного уровня до 24-й недели (т.е. Н0, Н2, Н4, Н6, Н8, Н10, Н12, Н14). , Ж16, Ж18, Ж20 и Ж22).

1.5 Процедура синовиальной биопсии Синовиальные биоптаты будут взяты либо с помощью биопсии под ультразвуковым контролем (USGB) для мелких суставов (запястья, MCP, PIP) или крупных суставов (локтевого, коленного, голеностопного), либо с помощью процедуры игольчатой ​​артроскопии (NAP) для крупных суставов. например колено.

В случае поражения крупных суставов биопсия одного и того же сустава будет проводиться на Н0 и Н24. Исходя из нашего опыта, повторение процедуры в большом суставе, даже если он не опух, легко достигается с помощью NAP.

В случае поражения мелких суставов выбор сустава для биопсии будет основываться на ультразвуковом (УЗИ) исследовании. УЗ-оценка с баллом более 2 по серой шкале/энергетической допплерографии (см. данные по УЗ-оценке ниже в приложениях) увеличивает количество оцениваемой синовиальной ткани после процедуры и качество РНК, выделенной из синовиальной ткани.

Если малый сустав, биопсированный на Н0, не имеет клинических поражений и/или имеет низкие баллы по серой шкале США/энергетической допплерографии ниже на Н24, для биопсии будет рассматриваться другой малый сустав, если он клинически поражен. Тем не менее, на Н24 процедура будет предпочтительно проводиться в одном и том же суставе, чтобы избежать предвзятости или слишком большой неоднородности при анализе данных.

Окно продолжительностью не более 15 дней допускается вокруг исходного уровня (Н0) и визита на Н24.

1.6 Основные параметры/конечные точки исследования

Основные конечные точки:

• выявление молекулярных путей, на которые нацелены устекинумаб, гуселкумаб, по сравнению с блокадой ФНО в синовиальных биоптатах (тотальные и одиночные клетки) пациентов с ПсА с активным заболеванием, несмотря на csDMARD, полученные до и через 24 недели после начала терапии.

Вторичные конечные точки:

- клинический ответ на Н24 с использованием критериев ответа DAS-44 или ACR20/50/70.

- выявление возможных синовиальных маркеров/путей, связанных с ответом на устекинумаб, гуселкумаб и анти-ФНО-альфа-терапию при ПсА, путем сопоставления исходных молекулярных сигналов с клиническим ответом, наблюдаемым на 24-й неделе.

- комплексный анализ ассоциации между молекулярными изменениями, вызванными анти-IL23, анти-IL23/12 и анти-ФНО в синовиальной оболочке, и основными или дополнительными (клиническими, биологическими, визуализирующими) переменными, информативными об ответе на терапию.

1.7 Клиническая оценка активности заболевания Активность заболевания будет оцениваться при скрининге, на исходном уровне (неделя 0), на 6-й, 12-й, 18-й и 24-й неделе. Ответ на терапию будет оцениваться одновременно с использованием утвержденных клинических показателей активности суставов, энтезисов и кожных заболеваний, а также опросников общей оценки состояния здоровья.

1.8 Лабораторные анализы Биохимический анализ будет проводиться при каждом посещении (Н0, Н6, Н12, Н18, Н24). Сюда относятся С-реактивный белок, ферменты печени (ГОТ, ГПТ, ГГТ, Алк. Фосфатаза), функция почек (мочевина, креатинин, клубочковая фильтрация), гемограмма, гликемия, липидный профиль (общий холестерин, ЛПНП, ЛПВП, триглицериды).

Статус HLA-B27 и вирусной инфекции (гепатит B и C, ВИЧ) будет проверяться при скрининге или на исходном уровне, а также при кожном тесте PPD или тесте крови на квантиферон-ТБ GOLD.

Образцы крови (сыворотка, плазма, пробирки с ЭДТА, PaxGene Анализ мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC)) также будут взяты и/или сохранены для дальнейшего анализа. для обоих участков) (не менее 4 биопсийных фрагментов на человека) РНК будет извлечена из материала (не менее 4 фрагментов) и использована для гибридизации микрочипов с олигонуклеотидными пятнами высокой плотности (препараты Genechip U133 Plus 2.0). Кластеризация и статистический анализ будут выполняться с использованием программного обеспечения Genespring®, чтобы идентифицировать транскрипты, регулируемые введением устекинумаба, гуселкумаба и блокады ФНО, а также идентифицировать транскрипты, связанные с реакцией на любой из этих препаратов. Веб-инструменты для анализа путей GO и KEGG будут использоваться для выявления потенциальных групп генов, принадлежащих к одному семейству.

Секвенирование РНК одиночных клеток (будет выполняться командой UZGent Site для обоих центров) (от 2 до 4 биопсий) Если будет получено достаточно биопсий, команда UZG проведет анализ отдельных клеток. Секвенирование РНК одиночных клеток стало незаменимым инструментом для анализа клеточной гетерогенности и разложения тканей на типы клеток и/или состояния клеток, что предлагает огромный потенциал для открытий de novo. Транскриптомные атласы отдельных клеток обеспечивают беспрецедентное разрешение для выявления сложных клеточных событий и углубления нашего понимания биологических систем.

Гистология/иммуногистохимия (от 2 до 4 биопсий будет проведено центром CUSL). Если ткани достаточно, часть образцов (2 биопсии) будет использоваться для патологических исследований и стандартной иммуногистохимии (CD3, CD4, CD8, CD15, CD20, CD68). и иммуноокрашивание CD138). Дополнительные окраски будут выполняться для подтверждения результатов транскриптомии или на основе предварительно заданных вопросов (маркеры, специфичные для Th1, Th17).

1.10 Изображение

• Рентген грудной клетки Рентген грудной клетки в задне-передней проекции будет получен локально во время скрининга, за исключением случаев, когда результаты рентгенографии грудной клетки получены не более чем за 3 месяца до скрининга (или исходного уровня) в соответствии с общими рекомендациями, касающимися использование биопрепаратов.

Рентген грудной клетки будет рассмотрен исследователем или его уполномоченным лицом, чтобы исключить пациентов с активной туберкулезной инфекцией.

Исследователи должны следовать местным рекомендациям по наблюдению за пациентами на предмет ТБ, если пациент относится к группе высокого риска заражения ТБ или реактивации латентного ТБ.

• Ультразвук: параллельно с клинической оценкой будет выполняться УЗИ опорно-двигательного аппарата (УЗИ) на исходном уровне (Н0), Н6, Н12 и Н24 для оценки активности заболевания с особым акцентом на суставы и энтезис.

• Магнитно-резонансная томография: оценка магнитно-резонансной томографии всего тела (WBMRI) будет проводиться в двух временных точках, до начала терапии и через 24 недели после начала лечения, в качестве дополнительного инструмента оценки активности заболевания. Пациенты с любыми противопоказаниями к МРТ (например, кардиостимуляторы, зажимы для аневризмы, искусственные сердечные клапаны, ушные имплантаты, металлические фрагменты, посторонние предметы в глазах, на коже или теле или тяжелая клаустрофобия) эта процедура не выполняется. отек и эрозия. Изображения будут анализироваться локально. Показания сканирования будут выполняться локально.

1.11 Продолжительность обучения Продолжительность обучения: 3 года

• Период отбора начнется: декабрь 2019 г.

• Предполагаемое включение первого пациента (FPI): январь 2020 г.

• Расчетное время включения последнего пациента (LPI): январь 2023 г.

• Предполагаемый последний визит пациента (LPLV): июнь 2023 г.

• Окончание исследования: сентябрь 2023 г.

• Краткое содержание публикации: декабрь 2023 г.
• Окончательный отчет: октябрь 2023 г.