Технология одноклеточного секвенирования, используемая для выявления гетерогенности вторичного гиперпаратиреоза

В рамках этого проекта планируется отобрать случаи, соответствующие исследовательским требованиям, взять вторичный гиперпаратиреоз, первичный гиперпаратиреоз и нормальную ткань паращитовидной железы человека, всего три группы, по 4 случая в каждой группе, с помощью метода транскрипции и секвенирования отдельных клеток, построить карту типов функций паращитовидной железы человека, выявить структуру генов и статус экспрессии генов в клетках, а также визуализировать характеристики экспрессии, межклеточную гетерогенность и гетерогенность подмножеств клеток вторичных клеток гиперпаратиреоидной железы в иерархическом порядке, нарисовать одноклеточную карту и сравнить различия между группами. Изучить патогенез вторичного гиперпаратиреоза.

Вторичный гиперпаратиреоз, ткань паращитовидной железы первичного гиперпаратиреоза и нормальная ткань паращитовидной железы, полученная случайно, собирали, замораживали и консервировали, замороженную ткань оттаивали, готовили одноклеточную суспензию, и каждая клетка была специально помечена системой Mozhuo Genomics, после разрушения масла полимеразной цепью. амплификация реакции, обратная транскрипция для получения комплементарной ДНК, а также библиотека комплементарной ДНК, прошедшая проверку качества, была создана для получения высококачественных данных о клетках паращитовидной железы. Для уменьшения размерности, кластеризации и визуализации данных использовались Cell Ranger, пакет R Seurat и диаграмма уменьшения размерности t-SNE.

Чтобы построить одноклеточный атлас паращитовидных желез, исследователи провели кластерный анализ сходных клеток по профилю экспрессии генов, а затем визуализировали данные с помощью t-SNE. По результатам кластеризации клеток были идентифицированы специфические и высокоэкспрессированные гены в каждом кластере клеток. Популяции клеток идентифицировали по экспрессии ориентирных генов и сравнивали различия в типах клеток и пропорциях между группами.