Enkelstegs antigenladdning och TLR-aktivering av dendritiska celler hos melanompatienter

1. Bakgrund Immunterapi med ex vivo-genererade och tumörantigen-laddade dendritiska celler (DC) har nu framgångsrikt introducerats på kliniken. Ett begränsat, men konsekvent, antal objektiva immunologiska och kliniska svar har observerats. Hittills är det fortfarande oklart varför vissa patienter svarar och andra inte, men det finns en allmän konsensus om att de nuvarande protokollen som tillämpas för att generera DC kanske inte leder till induktion av optimala Th1-svar. Utredarna och andra har visat att DC-mognad är en av de avgörande faktorerna, inte bara för effektiv DC-migrering utan också för att inducera effektiva antitumörimmunsvar hos cancerpatienter. För närvarande består den "gyllene standarden" som används för att mogna DC av en cocktail av pro-inflammatoriska cytokiner (IL-1b, IL-6, TNFa) och prostaglandin E2 (PGE2). Nya musdata visade emellertid att mognad av DC av enbart pro-inflammatoriska cytokiner gav DC som stödde T-cells klonal expansion, men misslyckades med att effektivt styra effektor T-cellsdifferentiering. Intressant nog kunde DC mognade i närvaro av Toll like receptor (TLR) ligander inducera full T-cells effektorfunktion och släppte lös mer potenta immunsvar. Utredarna har nyligen identifierat vacciner mot infektionssjukdomar som innehåller TLR-ligander och som kan inducera DC-mognad. Denna kunskap ger en ny tillämpning för dessa kliniskt tillämpliga medel: DC-stimulatorer av klinisk kvalitet. Ett mognadsprotokoll för klinisk grad av DC utvecklas där TLR-ligander (förebyggande vacciner) och PGE2 kombineras vilket resulterade i genereringen av mogen DC som utsöndrar höga nivåer av nyckelcytokinen IL-12. Dessutom inducerade dessa TLR-ligandmognade DC (TLR-DC) T-celler som utsöndrar minst 20 gånger högre nivåer av effektorcytokinerna IFNa och TNFa jämfört med DC som mognat i frånvaro av TLR-ligander.

   I gruppen av Kris Thielemans och det visades att den T-cellstimulerande kapaciteten hos peptidpulsad DC kan förbättras avsevärt genom att förse dem med tre olika molekylära adjuvanser genom elektroporering med mRNA som kodar för en så kallad TriMix av CD40-ligand (CD40L) CD70 och en konstitutivt aktiv form av TLR4 (caTLR4). Kombinationen av CD40L- och caTLR4-elektroporering skulle efterlikna CD40-ligering och TLR4-signalering av DC och genererar fenotypiskt mogen, cytokin/kemokin-utsöndrande DC, vilket har visats för CD40- och TLR4-ligering genom tillsats av löslig CD40L och lipopolysackarid. Å andra sidan skulle införandet av CD70 i DC ge en samstimulerande signal till CD27+ naiva T-celler genom att hämma aktiverad T-cellsapoptos och genom att stödja T-cellsproliferation.

   Sammanfattningsvis visar dessa in vitro-data att både TLR-DC och Trimix DC är lovande kandidater för att förbättra immunologiska och kliniska svar i cancerimmunterapi.

2. Mål Detta är en explorativ studie som består av två delar. I del I utförs dosökning och det primära målet är säkerheten för olika doser av TLR-DC och Trimix DC. I del II kommer Trimix DC-vaccination att jämföras med TLR-DC-vaccination och det primära syftet med denna del är det immunologiska svaret, med toxicitet och klinisk effekt som sekundära mål. Dessa studier kommer att ge viktiga data om säkerhet och immunologiska effekter av TLR-DC och Trimix DC.
3. Studiedesign Del I av denna studie är en öppen dosökningsstudie. Del II av denna studie är en öppen randomiserad fas II-studie.
4. Studiepopulation Vår studiepopulation består av melanompatienter, med bevisat uttryck av melanomassocierade tumörantigener gp100 och tyrosinas. Melanompatienter med regional lymfkörtelmetastas där en radikal lymfkörteldissektion utförs inom 2 månader efter inkludering i denna studie (vidare hänvisad till som stadium III) och melanompatienter med mätbara fjärrmetastaser (vidare kallad stadium IV) kommer att inkluderas .
5. Huvudmål för studien Studiens primära mål är att undersöka toxiciteten hos TLR-DC och Trimix DC genom dosökning av DC-tal i del I, och att undersöka immunologiska svar på DC-vaccination i del II av studien.

Immunologiska svar är:

1. Aktivering av immunceller in vivo.
2. Det immunologiska svaret inducerat med TLR-DC och Trimix DC laddade med mRNA som kodar för melanomassocierade tumörantigener (gp100 och tyrosinas).

Säkerhet och klinisk effekt är sekundära mål.