Caricamento dell'antigene in un'unica fase e attivazione del TLR delle cellule dendritiche nei pazienti con melanoma

1. Razionale L'immunoterapia che applica cellule dendritiche (DC) generate ex vivo e caricate con antigeni tumorali è stata ora introdotta con successo nella clinica. È stato osservato un numero limitato, ma consistente, di risposte immunologiche e cliniche oggettive. Finora non è chiaro perché alcuni pazienti rispondano e altri no, ma vi è un consenso generale sul fatto che gli attuali protocolli applicati per generare DC potrebbero non portare all'induzione di risposte Th1 ottimali. I ricercatori e altri hanno dimostrato che la maturazione delle DC è uno dei fattori cruciali, non solo per un'efficace migrazione delle DC, ma anche per indurre efficaci risposte immunitarie antitumorali nei pazienti oncologici. Attualmente, il "gold standard" utilizzato per far maturare le DC è costituito da un cocktail di citochine pro-infiammatorie (IL-1b, IL-6, TNFa) e prostaglandina E2 (PGE2). Dati recenti sui topi hanno dimostrato, tuttavia, che la maturazione delle DC da parte esclusivamente di citochine pro-infiammatorie produceva DC che supportavano l'espansione clonale delle cellule T, ma non riuscivano a dirigere in modo efficiente la differenziazione delle cellule T effettrici. È interessante notare che le DC maturate in presenza di ligandi del recettore Toll like (TLR) sono state in grado di indurre la piena funzione effettrice delle cellule T e scatenare risposte immunitarie più potenti. I ricercatori hanno recentemente identificato vaccini contro malattie infettive che contengono ligandi TLR e sono in grado di indurre la maturazione DC. Questa conoscenza fornisce una nuova applicazione per questi agenti clinici applicabili: stimolatori DC di grado clinico. È stato sviluppato un protocollo di maturazione DC di grado clinico in cui i ligandi TLR (vaccini preventivi) e PGE2 sono combinati, il che ha portato alla generazione di DC mature che secernono alti livelli della citochina chiave IL-12. Inoltre, queste cellule T maturate con ligando TLR (TLR-DC) hanno indotto cellule T che secernono livelli almeno 20 volte superiori delle citochine effettrici IFNa e TNFa rispetto alle DC maturate in assenza di ligandi TLR.

   Nel gruppo di Kris Thielemans è stato dimostrato che la capacità di stimolazione delle cellule T delle DC pulsate con peptide può essere notevolmente migliorata fornendo loro tre diversi adiuvanti molecolari attraverso l'elettroporazione con mRNA che codifica un cosiddetto TriMix di ligando CD40 (CD40L) , CD70 e una forma costitutivamente attiva di TLR4 (caTLR4). La combinazione di elettroporazione di CD40L e caTLR4 imiterebbe la ligazione di CD40 e la segnalazione di TLR4 della DC e genera DC fenotipicamente mature, che secernono citochine/chemochine, come è stato dimostrato per la ligazione di CD40 e TLR4 attraverso l'aggiunta di CD40L solubile e lipopolisaccaride. D'altra parte, l'introduzione di CD70 nelle DC fornirebbe un segnale di costimolazione alle cellule T CD27+ naive inibendo l'apoptosi delle cellule T attivate e supportando la proliferazione delle cellule T.

   In conclusione, questi dati in vitro dimostrano che sia TLR-DC che Trimix DC sono candidati promettenti per migliorare le risposte immunologiche e cliniche nell'immunoterapia del cancro.

2. Obiettivi Questo è uno studio esplorativo, composto da due parti. Nella parte I viene eseguita l'escalation della dose e l'obiettivo primario è la sicurezza di diverse dosi di TLR-DC e Trimix DC. Nella parte II la vaccinazione Trimix DC sarà confrontata con la vaccinazione TLR-DC e l'obiettivo primario di questa parte è la risposta immunologica, con la tossicità e l'efficacia clinica come obiettivi secondari. Questi studi forniranno dati importanti sulla sicurezza e sugli effetti immunologici di TLR-DC e Trimix DC.
3. Disegno dello studio La parte I di questo studio è uno studio in aperto sull'incremento della dose. La parte II di questo studio è uno studio di fase II randomizzato in aperto.
4. Popolazione in studio La nostra popolazione in studio è composta da pazienti affetti da melanoma, con comprovata espressione degli antigeni tumorali associati al melanoma gp100 e tirosinasi. Saranno inclusi pazienti con melanoma con metastasi linfonodali regionali in cui viene eseguita una dissezione linfonodale radicale entro 2 mesi dall'inclusione in questo studio (di seguito denominato stadio III) e pazienti con melanoma con metastasi a distanza misurabili (di seguito denominato stadio IV) .
5. Principali endpoint dello studio Gli obiettivi primari dello studio sono indagare la tossicità di TLR-DC e Trimix DC mediante aumento della dose dei numeri di DC nella parte I e indagare le risposte immunologiche alla vaccinazione DC nella parte II dello studio.

Le risposte immunologiche sono:

1. L'attivazione delle cellule immunitarie in vivo.
2. La risposta immunologica indotta con TLR-DC e Trimix DC caricato con mRNA che codifica antigeni tumorali associati al melanoma (gp100 e tirosinasi).

La sicurezza e l'efficacia clinica sono obiettivi secondari.