Carregamento de antígeno de etapa única e ativação de TLR de células dendríticas em pacientes com melanoma

1. Justificativa A imunoterapia que aplica células dendríticas (DC) geradas ex vivo e carregadas com antígeno tumoral foi agora introduzida com sucesso na clínica. Foi observado um número limitado, mas consistente, de respostas imunológicas e clínicas objetivas. Até agora, não está claro por que alguns pacientes respondem e outros não, mas há um consenso geral de que os protocolos atuais aplicados para gerar DC podem não resultar na indução de respostas Th1 ideais. Os pesquisadores e outros demonstraram que a maturação das DC é um dos fatores cruciais, não apenas para a migração efetiva das DC, mas também para induzir respostas imunes antitumorais eficazes em pacientes com câncer. Atualmente, o "padrão ouro" utilizado para maturar DC consiste em um coquetel de citocinas pró-inflamatórias (IL-1b, IL-6, TNFa) e prostaglandina E2 (PGE2). Dados recentes de camundongos demonstraram, no entanto, que a maturação de DC apenas por citocinas pró-inflamatórias rendeu DC que suportou a expansão clonal de células T, mas falhou em direcionar eficientemente a diferenciação de células T efetoras. Curiosamente, as DC amadurecidas na presença de ligantes do receptor semelhante a Toll (TLR) foram capazes de induzir a função efetora completa das células T e desencadear respostas imunes mais potentes. Os pesquisadores identificaram recentemente vacinas contra doenças infecciosas que contêm ligantes de TLR e são capazes de induzir a maturação de DC. Esse conhecimento fornece uma nova aplicação para esses agentes clínicos aplicáveis: estimuladores DC de grau clínico. Um protocolo de maturação de DC de grau clínico é desenvolvido no qual ligantes de TLR (vacinas preventivas) e PGE2 são combinados, resultando na geração de DC maduras que secretam altos níveis da citocina chave IL-12. Além disso, essas DC maturadas com ligantes de TLR (TLR-DC) induziram células T que secretam níveis pelo menos 20 vezes maiores das citocinas efetoras IFNa e TNFa em comparação com as DC maturadas na ausência de ligantes de TLR.

   No grupo de Kris Thielemans, foi demonstrado que a capacidade estimulatória de células T de DC pulsadas com peptídeo pode ser bastante aumentada, fornecendo-lhes três adjuvantes moleculares diferentes por meio de eletroporação com mRNA que codifica um chamado TriMix de ligante CD40 (CD40L). , CD70 e uma forma constitutivamente ativa de TLR4 (caTLR4). A combinação de eletroporação de CD40L e caTLR4 imitaria a ligação de CD40 e a sinalização de TLR4 da DC e geraria DC fenotipicamente maduras, secretoras de citocinas/quimiocinas, como foi demonstrado para a ligação de CD40 e TLR4 através da adição de CD40L solúvel e lipopolissacarídeo. Por outro lado, a introdução de CD70 na DC forneceria um sinal co-estimulatório para células T virgens de CD27+, inibindo a apoptose de células T ativadas e apoiando a proliferação de células T.

   Em conclusão, esses dados in vitro demonstram que tanto TLR-DC quanto Trimix DC são candidatos promissores para melhorar as respostas imunológicas e clínicas na imunoterapia do câncer.

2. Objetivos Trata-se de um estudo exploratório, composto por duas partes. Na parte I, o aumento da dose é realizado e o objetivo principal é a segurança de diferentes doses de TLR-DC e Trimix DC. Na parte II a vacinação Trimix DC será comparada com a vacinação TLR-DC e o objetivo primário desta parte é a resposta imunológica, sendo a toxicidade e a eficácia clínica objetivos secundários. Esses estudos fornecerão dados importantes sobre a segurança e os efeitos imunológicos de TLR-DC e Trimix DC.
3. Desenho do estudo A Parte I deste estudo é um estudo aberto de escalonamento de dose. A Parte II deste estudo é um estudo de fase II randomizado de rótulo aberto.
4. População do estudo Nossa população do estudo consiste em pacientes com melanoma, com expressão comprovada de antígenos tumorais associados ao melanoma gp100 e tirosinase. Pacientes com melanoma com metástases linfonodais regionais nos quais uma dissecção linfonodal radical é realizada dentro de 2 meses após a inclusão neste estudo (referido posteriormente como estágio III) e pacientes com melanoma com metástases distantes mensuráveis ​​(referidos posteriormente como estágio IV) serão incluídos .
5. Principais objetivos do estudo Os objetivos primários do estudo são investigar a toxicidade de TLR-DC e Trimix DC por escalonamento de dose de números de DC na parte I e investigar respostas imunológicas após vacinação com DC na parte II do estudo.

As respostas imunológicas são:

1. A ativação de células imunes in vivo.
2. A resposta imunológica induzida com TLR-DC e Trimix DC carregada com mRNA que codifica antígenos tumorais associados ao melanoma (gp100 e tirosinase).

Segurança e eficácia clínica são objetivos secundários.