Jednostupňové zavedení antigenu a TLR aktivace dendritických buněk u pacientů s melanomem

1. Odůvodnění Imunoterapie využívající ex vivo generované a nádorovým antigenem nabité dendritické buňky (DC) byla nyní úspěšně zavedena na kliniku. Byl pozorován omezený, ale konzistentní počet objektivních imunologických a klinických odpovědí. Dosud zůstává nejasné, proč někteří pacienti reagují a jiní ne, ale panuje všeobecná shoda, že současné protokoly aplikované ke generování DC nemusí vést k indukci optimální Th1 odpovědí. Výzkumníci a další prokázali, že zrání DC je jedním z klíčových faktorů nejen pro účinnou migraci DC, ale také pro indukci účinných protinádorových imunitních reakcí u pacientů s rakovinou. V současnosti se „zlatý standard“ používaný ke zrání DC skládá z koktejlu prozánětlivých cytokinů (IL-1b, IL-6, TNFa) a prostaglandinu E2 (PGE2). Nedávná data myší však ukázala, že zrání DC pouze prozánětlivými cytokiny poskytlo DC, které podporovalo klonální expanzi T buněk, ale nedokázalo účinně řídit diferenciaci efektorových T buněk. Je zajímavé, že DC zralé v přítomnosti ligandů Toll like receptor (TLR) byly schopny indukovat plnou funkci efektoru T buněk a rozpoutat silnější imunitní reakce. Výzkumníci nedávno identifikovali vakcíny proti infekčním onemocněním, které obsahují TLR ligandy a jsou schopné vyvolat zrání DC. Tyto znalosti poskytují novou aplikaci pro tyto klinicky použitelné látky: klinické stimulátory DC. Je vyvinut protokol klinického zrání DC, ve kterém jsou kombinovány ligandy TLR (preventivní vakcíny) a PGE2, což vedlo ke vzniku zralých DC, které vylučují vysoké hladiny klíčového cytokinu IL-12. Kromě toho tyto TLR-ligandem zralé DC (TLR-DC) indukovaly T buňky secernující alespoň 20krát vyšší hladiny efektorových cytokinů IFNa a TNFa ve srovnání s DC zralými v nepřítomnosti TLR ligandů.

   Ve skupině Krise Thielemanse a bylo prokázáno, že stimulační kapacita T-buněk u peptidem pulzovaných DC může být výrazně zvýšena tím, že se jim poskytnou tři různá molekulární adjuvans prostřednictvím elektroporace s mRNA kódující takzvaný TriMix ligandu CD40 (CD40L) CD70 a konstitutivně aktivní forma TLR4 (caTLR4). Kombinace elektroporace CD40L a caTLR4 by napodobovala ligaci CD40 a signalizaci TLR4 DC a generovala fenotypicky zralé DC vylučující cytokin/chemokin, jak bylo ukázáno pro ligaci CD40 a TLR4 přidáním rozpustného CD40L a lipopolysacharidu. Na druhé straně by zavedení CD70 do DC poskytlo kostimulační signál CD27+ naivním T lymfocytům inhibicí aktivované apoptózy T lymfocytů a podporou proliferace T lymfocytů.

   Závěrem lze říci, že tato data in vitro ukazují, že jak TLR-DC, tak Trimix DC jsou slibnými kandidáty na zlepšení imunologických a klinických odpovědí v imunoterapii rakoviny.

2. Cíle Jedná se o průzkumnou studii, která se skládá ze dvou částí. V části I se provádí eskalace dávky a primárním cílem je bezpečnost různých dávek TLR-DC a Trimix DC. V části II bude vakcinace Trimix DC porovnána s vakcinací TLR-DC a primárním cílem této části je imunologická odpověď, přičemž toxicita a klinická účinnost jsou sekundárními cíli. Tyto studie poskytnou důležitá data o bezpečnosti a imunologických účincích TLR-DC a Trimix DC.
3. Návrh studie Část I této studie je otevřená studie s eskalací dávky. Část II této studie je otevřená randomizovaná studie fáze II.
4. Studijní populace Naše studijní populace se skládá z pacientů s melanomem s prokázanou expresí nádorových antigenů gp100 a tyrosinázy asociovaných s melanomem. Budou zahrnuti pacienti s melanomem s metastázami v regionálních lymfatických uzlinách, u kterých byla provedena radikální disekce lymfatických uzlin do 2 měsíců od zařazení do této studie (dále označované jako stadium III) a pacienti s melanomem s měřitelnými vzdálenými metastázami (dále označovaní jako stadium IV). .
5. Hlavní koncové body studie Primárními cíli studie je prozkoumat toxicitu TLR-DC a Trimix DC zvýšením dávky čísel DC v části I a prozkoumat imunologické reakce na vakcinaci DC v části II studie.

Imunologické odpovědi jsou:

1. Aktivace imunitních buněk in vivo.
2. Imunologická odpověď indukovaná TLR-DC a Trimix DC naloženými mRNA kódující nádorové antigeny asociované s melanomem (gp100 a tyrosinázu).

Bezpečnost a klinická účinnost jsou sekundárními cíli.