Jednoetapowe ładowanie antygenem i aktywacja TLR komórek dendrytycznych u pacjentów z czerniakiem

1. Uzasadnienie Immunoterapia z zastosowaniem komórek dendrytycznych (DC) wytworzonych ex vivo i obciążonych antygenem nowotworowym została z powodzeniem wprowadzona w klinice. Zaobserwowano ograniczoną, ale stałą liczbę obiektywnych odpowiedzi immunologicznych i klinicznych. Jak dotąd pozostaje niejasne, dlaczego niektórzy pacjenci odpowiadają, a inni nie, ale istnieje ogólna zgoda co do tego, że obecne protokoły stosowane do generowania DC mogą nie powodować indukcji optymalnych odpowiedzi Th1. Badacze i inni wykazali, że dojrzewanie DC jest jednym z kluczowych czynników, nie tylko dla skutecznej migracji DC, ale także dla wywołania skutecznych przeciwnowotworowych odpowiedzi immunologicznych u pacjentów z rakiem. Obecnie „złotym standardem” stosowanym do dojrzewania DC jest koktajl cytokin prozapalnych (IL-1b, IL-6, TNFa) oraz prostaglandyny E2 (PGE2). Ostatnie dane na myszach wykazały jednak, że dojrzewanie DC wyłącznie przez cytokiny prozapalne dało DC, które wspierało klonalną ekspansję komórek T, ale nie kierowało skutecznie różnicowaniem efektorowych komórek T. Co ciekawe, DC dojrzewające w obecności ligandów receptora Toll-podobnego (TLR) były w stanie indukować pełną funkcję efektorową komórek T i wyzwalać silniejsze odpowiedzi immunologiczne. Badacze niedawno zidentyfikowali szczepionki przeciwko chorobom zakaźnym, które zawierają ligandy TLR i są zdolne do indukowania dojrzewania DC. Ta wiedza zapewnia nowe zastosowanie tych środków stosowanych w praktyce klinicznej: stymulatory prądu stałego klasy klinicznej. Opracowano protokół dojrzewania DC klasy klinicznej, w którym łączy się ligandy TLR (szczepionki zapobiegawcze) i PGE2, co zaowocowało wytworzeniem dojrzałych DC, które wydzielają wysokie poziomy kluczowej cytokiny IL-12. Co więcej, te DC dojrzewające z ligandem TLR (TLR-DC) indukowały komórki T wydzielające co najmniej 20-krotnie wyższe poziomy cytokin efektorowych IFNa i TNFa w porównaniu z DC dojrzewającymi pod nieobecność ligandów TLR.

   W grupie Krisa Thielemansa wykazano, że zdolność stymulowania limfocytów T DC pulsowanego peptydem można znacznie zwiększyć, dostarczając im trzy różne adiuwanty molekularne poprzez elektroporację z mRNA kodującym tak zwaną TriMix ligandu CD40 (CD40L) , CD70 i konstytutywnie aktywna postać TLR4 (caTLR4). Połączenie elektroporacji CD40L i caTLR4 naśladowałoby ligację CD40 i sygnalizację TLR4 DC i generuje fenotypowo dojrzały DC wydzielający cytokiny/chemokiny, jak wykazano dla ligacji CD40 i TLR4 przez dodanie rozpuszczalnego CD40L i lipopolisacharydu. Z drugiej strony wprowadzenie CD70 do DC zapewniłoby sygnał kostymulujący dla naiwnych limfocytów T CD27+ poprzez hamowanie apoptozy aktywowanych limfocytów T i wspomaganie proliferacji limfocytów T.

   Podsumowując, te dane in vitro pokazują, że zarówno TLR-DC, jak i Trimix DC są obiecującymi kandydatami do poprawy odpowiedzi immunologicznych i klinicznych w immunoterapii raka.

2. Cele Jest to badanie eksploracyjne, składające się z dwóch części. W części I przeprowadzana jest eskalacja dawki, a głównym celem jest zapewnienie bezpieczeństwa różnych dawek TLR-DC i Trimix DC. W części II szczepienie Trimix DC zostanie porównane ze szczepieniem TLR-DC, a głównym celem tej części jest odpowiedź immunologiczna, podczas gdy toksyczność i skuteczność kliniczna są celami drugorzędnymi. Badania te dostarczą ważnych danych na temat bezpieczeństwa i skutków immunologicznych TLR-DC i Trimix DC.
3. Projekt badania Część I tego badania jest otwartym badaniem zwiększania dawki. Część II tego badania to otwarte randomizowane badanie fazy II.
4. Populacja badana Nasza populacja badana składa się z pacjentów z czerniakiem, u których udowodniono ekspresję antygenów nowotworowych gp100 i tyrozynazy związanych z czerniakiem. Pacjenci z czerniakiem z przerzutami do regionalnych węzłów chłonnych, u których wykonano radykalne wycięcie węzłów chłonnych w ciągu 2 miesięcy od włączenia do tego badania (dalej określane jako stadium III) oraz pacjenci z czerniakiem z mierzalnymi przerzutami odległymi (określanymi dalej jako stadium IV) zostaną włączeni .
5. Główne punkty końcowe badania Głównym celem badania jest zbadanie toksyczności TLR-DC i Trimix DC poprzez zwiększenie dawki liczby DC w części I oraz zbadanie odpowiedzi immunologicznych po szczepieniu DC w części II badania.

Odpowiedzi immunologiczne to:

1. Aktywacja komórek odpornościowych in vivo.
2. Odpowiedź immunologiczna indukowana przez TLR-DC i Trimix DC obciążone mRNA kodującym antygeny nowotworowe związane z czerniakiem (gp100 i tyrozynaza).

Bezpieczeństwo i skuteczność kliniczna to cele drugorzędne.