Sambandet mellan trombocytreaktivitet och blödningsrisk vid ITP för vuxna

Utredarna genomför en prospektiv multicenter dubbelblind studie av 400 vuxna patienter med immun trombocytopeni från 6 vårdcentraler i Kina. Vi antog tre olika analyser som undersökte trombocytfunktion och reaktivitet. 1) Flödescytometri: Citratantikoagulerat helblod späddes i PBS för att resultera i 20×10^9/L trombocyter, och 20 μl delades upp i provrör av polystyren. Tio mikroliter anti-CD42b-PE tillsattes och inkuberades vid rumstemperatur under 10 min. Agonister (TRAP-6 12,5 μMol/L, Kollagen 20 μg/mL, ADP 2 μM, Epinefrin 20 μM, Arakidonsyra 0,275 mM, Ristocetin 1,5 mg/mL) eller PBS tillsattes (10 μl igen för varje) . Sedan tillsattes mAb PAC-1-FITC eller anti-CD62p-FITC (10 μl vardera) eller motsvarande isotypmatchade kontroller. Efter 15 minuters inkubation i mörker stoppades reaktionen med 500 μl PBS. Prover analyserades på en flödescytometer (FACScan, Becton-Dickinson) genom att mäta 10 000 händelser i den CD42b-positiva fraktionen. 2) Filopodia kvantifiering: Kortfattat tilläts trombocyter i Tyrodes buffert att vidhäfta till VWF (9×10^6 celler/täckglas) i närvaro av botrocetin (1 μg/mL) och Integrilin (40 μg/mL) vid 37°C . Efter 15 minuter avlägsnades icke-vidhäftande blodplättar genom tvättning och vidhäftande blodplättar fixerades med 4% PFA, färgades med TRITC-falloidin (2 μg/ml) och sågs med epifluorescensmikroskopi för filopodiaräkning. 3) Trombocytaggregation: Mäts på en automatiserad blodplättsaggregationsanalysator.

Att förstå blödningsrisk och bakomliggande bestämningsfaktorer för blödning är viktigt för att hjälpa till att känna igen patienter som kommer att behöva farmakologisk behandling även vid högre trombocytantal. Tidigare studier har föreslagit att lågt antal blodplättar, ökad patientålder, användning av samtidig medicinering och manligt kön är associerade med ökad blödningsrisk. Föreliggande undersökning kommer att svara på om trombocytfunktionen förutsäger svårighetsgraden av blödning hos vuxna ITP-patienter. Klinisk information om rekryterade deltagare inkluderar kön, ålder, trombocytantal och fysisk/laboratorieundersökning. Blindning sattes mellan utredare som utvärderade blödningsrisker och de som utförde experiment.