A vérlemezke-reaktivitás és a vérzési kockázat közötti összefüggés felnőttkori ITP-ben

A kutatók egy prospektív, többközpontú, kettős vak vizsgálatot végeznek 400 immunthrombocytopeniában szenvedő felnőtt beteg bevonásával, 6 kínai egészségügyi központból. Három különböző vizsgálatot alkalmaztunk, amelyek a vérlemezke funkciót és a reaktivitást vizsgálták. 1) Áramlási citometria: Citráttal antikoagulált teljes vért PBS-ben hígítottunk, hogy 20×10^9/L vérlemezkék keletkezzenek, és 20 μl-t polisztirol kémcsövekbe osztunk. Tíz mikroliter anti-CD42b-PE-t adtunk hozzá, és szobahőmérsékleten 10 percig inkubáltuk. Agonistákat (TRAP-6 12,5 μMol/L, kollagén 20 μg/ml, ADP 2 μM, epinefrin 20 μM, arachidonsav 0,275 mM, Ristocetin 1,5 mg/ml) vagy PBS-t adtunk hozzá (egyenként 10 μg/ml), majd ismét 10 μl percig . Ezután PAC-1-FITC vagy anti-CD62p-FITC mAb-t (mindegyik 10 μl) vagy a megfelelő izotípusnak megfelelő kontrollokat adtunk hozzá. 15 perces, sötétben történő inkubálás után a reakciót 500 μl PBS-sel leállítottuk. A mintákat áramlási citométeren (FACScan, Becton-Dickinson) elemeztük, 10 000 esemény mérésével a CD42b-pozitív frakcióban. 2) A filopodiák mennyiségi meghatározása: Röviden, a Tyrode-pufferben lévő vérlemezkéket hagytuk megtapadni a VWF-hez (9 × 10^6 sejt/fedőlemez) botrocetin (1 μg/ml) és Integrilin (40 μg/ml) jelenlétében 37 °C-on. . 15 perc elteltével a nem tapadó vérlemezkéket mosással eltávolítottuk, és a megtapadó vérlemezkéket 4%-os PFA-val fixáltuk, TRITC-falloidinnel (2 μg/ml) megfestettük, és epifluoreszcens mikroszkóppal megvizsgáltuk a filopodiák számát. 3) Thrombocyta-aggregáció: Automata trombocita-aggregáció-analizátoron mérve.

A vérzés kockázatának és a vérzés hátterében álló tényezők megértése fontos annak érdekében, hogy segítsen felismerni azokat a betegeket, akiknek még magasabb vérlemezkeszám esetén is szükségük lesz gyógyszeres kezelésre. Korábbi tanulmányok azt sugallták, hogy az alacsony vérlemezkeszám, a betegek megnövekedett életkora, az egyidejűleg alkalmazott gyógyszerek és a férfi nemi élet fokozott vérzési kockázattal jár. A jelen vizsgálat arra ad választ, hogy a vérlemezke funkció előrejelzi-e a vérzés súlyosságát felnőtt ITP-betegeknél. A felvett résztvevők klinikai információi közé tartozik a nem, az életkor, a vérlemezkeszám és a fizikális/laboratóriumi vizsgálat. Vakításra került sor a vérzési kockázatot értékelő és a kísérleteket végző kutatók között.