Verihiutaleiden reaktiivisuuden ja verenvuotoriskin välinen yhteys aikuisten ITP:ssä

Tutkijat ovat tekemässä tulevaa monikeskus-kaksoissokkotutkimusta 400 immuunitrombosytopeniaa sairastavalla aikuispotilaalla kuudesta Kiinan lääketieteellisestä keskuksesta. Otimme käyttöön kolme erilaista määritystä, jotka tutkivat verihiutaleiden toimintaa ja reaktiivisuutta. 1) Virtaussytometria: Sitraatilla antikoaguloitua kokoveria laimennettiin PBS:ään, jolloin saatiin 20 x 10^9/l verihiutaleita, ja 20 µl jaettiin polystyreenikoeputkiin. Kymmenen mikrolitraa anti-CD42b-PE:tä lisättiin ja inkuboitiin huoneenlämpötilassa 10 minuuttia. Agonisteja (TRAP-6 12,5 μMol/L, kollageenia 20 μg/ml, ADP 2 μM, epinefriiniä 20 μM, arakidonihappoa 0,275 mM, ristosetiinia 1,5 mg/ml) tai PBS:ää lisättiin (10 μm kumpaakin 10 min) uudelleen. . Sitten lisättiin mAb PAC-1-FITC tai anti-CD62p-FITC (kumpaakin 10 μl) tai vastaavat isotyyppisovitetut kontrollit. 15 minuutin pimeässä inkuboinnin jälkeen reaktio pysäytettiin 500 µl:lla PBS:ää. Näytteet analysoitiin virtaussytometrillä (FACScan, Becton-Dickinson) mittaamalla 10 000 tapahtumaa CD42b-positiivisessa fraktiossa. 2) Filopodian kvantifiointi: Lyhyesti, Tyroden puskurissa olevien verihiutaleiden annettiin kiinnittyä VWF:ään (9 × 10^6 solua/peitelasi) botrosetiinin (1 μg/ml) ja Integriliinin (40 μg/ml) läsnä ollessa 37 °C:ssa . 15 minuutin kuluttua kiinnittymättömät verihiutaleet poistettiin pesemällä ja kiinnittyneet verihiutaleet kiinnitettiin 4-prosenttisella PFA:lla, värjättiin TRITC-falloidiinilla (2 µg/ml) ja tarkasteltiin epifluoresenssimikroskopialla filopodioiden määrän suhteen. 3) Verihiutaleiden aggregaatio: Mitattu automaattisella verihiutaleiden aggregaatioanalysaattorilla.

Vuotoriskin ja verenvuodon taustalla olevien tekijöiden ymmärtäminen on tärkeää, jotta voidaan tunnistaa potilaat, jotka tarvitsevat farmakologista hoitoa jopa korkeammilla verihiutaleiden määrällä. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että alhainen verihiutaleiden määrä, potilaan iän lisääntyminen, samanaikainen lääkkeiden käyttö ja miespuolinen sukupuoli liittyvät lisääntyneeseen verenvuotoriskiin. Tämä tutkimus antaa vastauksen, ennustaako verihiutaleiden toiminta verenvuodon vakavuutta aikuisilla ITP-potilailla. Rekrytoitujen osallistujien kliiniset tiedot sisältävät sukupuolen, iän, verihiutaleiden määrän ja fyysisen/laboratoriotutkimuksen. Sokkoutettiin verenvuotoriskiä arvioineiden ja kokeita suorittaneiden tutkijoiden välillä.