Związek między reaktywnością płytek krwi a ryzykiem krwawienia w ITP u dorosłych

Badacze przeprowadzają prospektywne, wieloośrodkowe, podwójnie ślepe badanie z udziałem 400 dorosłych pacjentów z małopłytkowością immunologiczną z 6 ośrodków medycznych w Chinach. Przyjęliśmy trzy różne testy, które badały funkcję i reaktywność płytek krwi. 1) Cytometria przepływowa: Pełną krew antykoagulowaną cytrynianem rozcieńczono w PBS do uzyskania 20 x 109/l płytek krwi i 20 μl podzielono na porcje do polistyrenowych probówek testowych. Dodano dziesięć mikrolitrów anty-CD42b-PE i inkubowano w temperaturze pokojowej przez 10 minut. Dodawano agonistów (TRAP-6 12,5 μMol/l, kolagen 20 μg/ml, ADP 2 μM, epinefryna 20 μM, kwas arachidonowy 0,275 mM, rystocetyna 1,5 mg/ml) lub PBS (każdy po 10 μl) i ponownie inkubowano przez 10 min. . Następnie dodano mAb PAC-1-FITC lub anty-CD62p-FITC (po 10 μl) lub odpowiednie kontrole dopasowane izotypowo. Po 15-minutowej inkubacji w ciemności reakcję zatrzymano dodając 500 μl PBS. Próbki analizowano na cytometrze przepływowym (FACScan, Becton-Dickinson) mierząc 10 000 zdarzeń we frakcji CD42b-dodatniej. 2) Ocena ilościowa filopodiów: Pokrótce, płytki krwi w buforze Tyrode'a pozostawiono do adhezji do VWF (9×10^6 komórek/szkiełko nakrywkowe) w obecności botrocetyny (1 μg/ml) i Integriliny (40 μg/ml) w 37°C . Po 15 minutach nieprzylegające płytki krwi usunięto przez przemycie, a przylegające płytki krwi utrwalono 4% PFA, wybarwiono TRITC-falloidyną (2 μg/ml) i oglądano za pomocą mikroskopii epifluorescencyjnej pod kątem liczby filopodiów. 3) Agregacja płytek krwi: Mierzona na automatycznym analizatorze agregacji płytek krwi.

Zrozumienie ryzyka krwawienia i leżących u jego podstaw czynników warunkujących krwawienie jest ważne, aby pomóc rozpoznać pacjentów, którzy będą wymagać leczenia farmakologicznego nawet przy większej liczbie płytek krwi. Wcześniejsze badania sugerowały, że mała liczba płytek krwi, starszy wiek pacjentów, równoczesne stosowanie leków i płeć męska są związane ze zwiększonym ryzykiem krwawienia. Niniejsze badanie odpowie na pytanie, czy czynność płytek krwi pozwala przewidzieć nasilenie krwawienia u dorosłych pacjentów z pierwotną małopłytkowością immunologiczną. Informacje kliniczne rekrutowanych uczestników obejmują płeć, wiek, liczbę płytek krwi oraz badanie fizykalne/laboratoryjne. Zaślepienie zostało ustalone między badaczami, którzy oceniali ryzyko krwawienia, a tymi, którzy przeprowadzali eksperymenty.