Sammenhængen mellem blodpladereaktivitet og blødningsrisiko ved ITP hos voksne

Efterforskerne er i gang med en prospektiv multicenter dobbelt-blind undersøgelse af 400 voksne patienter med immun trombocytopeni fra 6 medicinske centre i Kina. Vi vedtog tre forskellige assays, der undersøgte blodpladefunktion og reaktivitet. 1) Flowcytometri: Citrat-antikoaguleret fuldblod blev fortyndet i PBS for at resultere i 20×10^9/L blodplader, og 20 μl blev fordelt i polystyrenreagensglas. Ti mikroliter anti-CD42b-PE blev tilsat og inkuberet ved stuetemperatur i 10 minutter. Agonister (TRAP-6 12,5 μMol/L, Collagen 20 μg/mL, ADP 2 μM, Epinephrin 20 μM, Arachidonsyre 0,275 mM, Ristocetin 1,5 mg/mL) eller PBS blev tilsat (10 μl igen for hver) . Derefter blev mAb PAC-1-FITC eller anti-CD62p-FITC (10 μl hver) eller de tilsvarende isotype-matchede kontroller tilføjet. Efter 15 minutters inkubation i mørke blev reaktionen standset med 500 μl PBS. Prøver blev analyseret på et flowcytometer (FACScan, Becton-Dickinson) ved at måle 10.000 hændelser i den CD42b-positive fraktion. 2) Filopodia-kvantificering: Kort fortalt fik blodplader i Tyrodes buffer lov til at klæbe til VWF (9×10^6 celler/dækglas) i nærværelse af botrocetin (1 μg/mL) og Integrilin (40 μg/mL) ved 37°C . Efter 15 minutter blev ikke-klæbende blodplader fjernet ved vask, og klæbende blodplader blev fikseret med 4% PFA, farvet med TRITC-phalloidin (2 μg/mL) og set ved epifluorescensmikroskopi for filopodiatælling. 3) Blodpladeaggregation: Målt på en automatiseret blodpladeaggregationsanalysator.

Forståelse af blødningsrisiko og underliggende determinanter for blødning er vigtig for at hjælpe med at genkende patienter, som vil kræve farmakologisk behandling selv ved højere blodpladetal. Tidligere undersøgelser har antydet, at lavt blodpladetal, øget patientalder, brug af samtidig medicin og mandligt køn er forbundet med øget blødningsrisiko. Den foreliggende undersøgelse vil besvare, om blodpladefunktionen forudsiger sværhedsgraden af ​​blødning hos voksne ITP-patienter. Klinisk information om rekrutterede deltagere omfatter køn, alder, blodpladetal og fysisk/laboratorieundersøgelse. Blænding blev sat mellem efterforskere, der vurderede blødningsrisici, og dem, der udførte eksperimenter.