A associação entre reatividade plaquetária e risco de sangramento em PTI em adultos

Os investigadores estão realizando um estudo prospectivo multicêntrico duplo-cego de 400 pacientes adultos com trombocitopenia imune de 6 centros médicos na China. Adotamos três ensaios diferentes que examinaram a função e a reatividade plaquetária. 1) Citometria de fluxo: O sangue total anticoagulado com citrato foi diluído em PBS para resultar em 20×10^9/L de plaquetas, e 20 μl foram aliquotados em tubos de ensaio de poliestireno. Dez microlitros de anti-CD42b-PE foram adicionados e incubados à temperatura ambiente por 10 min. Agonistas (TRAP-6 12,5 μMol/L, Colágeno 20 μg/mL, ADP 2 μM, Epinefrina 20 μM, Ácido Araquidônico 0,275 mM, Ristocetina 1,5 mg/mL) ou PBS foram adicionados (10 μl cada) e incubados novamente por 10 min . Em seguida, mAb PAC-1-FITC ou anti-CD62p-FITC (10 μl cada) ou os controles correspondentes de isotipo correspondente foram adicionados. Após 15 minutos de incubação no escuro, a reação foi interrompida com 500 μl de PBS. As amostras foram analisadas em um citômetro de fluxo (FACScan, Becton-Dickinson) medindo 10.000 eventos na fração positiva de CD42b. 2) Quantificação de Filopodia: Resumidamente, as plaquetas no tampão de Tyrode foram deixadas aderir ao VWF (9 × 10^6 células/lamela) na presença de botrocetina (1 μg/mL) e Integrilin (40 μg/mL) a 37°C . Após 15 min, as plaquetas não aderentes foram removidas por lavagem e as plaquetas aderentes foram fixadas com 4% de PFA, coradas com TRITC-faloidina (2 μg/mL) e visualizadas por microscopia de epifluorescência para contagem de filopódios. 3) Agregação plaquetária: medida em um analisador automatizado de agregação plaquetária.

Compreender o risco de sangramento e os determinantes subjacentes do sangramento é importante para ajudar a reconhecer os pacientes que precisarão de terapia farmacológica mesmo com contagens de plaquetas mais altas. Estudos anteriores sugeriram que baixas contagens de plaquetas, aumento da idade do paciente, uso de medicamentos concomitantes e sexo masculino estão associados ao aumento do risco de sangramento. A presente investigação responderá se a função plaquetária prediz a gravidade do sangramento em pacientes adultos com PTI. As informações clínicas dos participantes recrutados incluem sexo, idade, contagem de plaquetas e exame físico/laboratorial. O cegamento foi definido entre os investigadores que avaliaram os riscos de sangramento e aqueles que realizaram experimentos.