De associatie tussen bloedplaatjesreactiviteit en bloedingsrisico bij volwassen ITP

De onderzoekers voeren een prospectieve dubbelblinde studie in meerdere centra uit bij 400 volwassen patiënten met immuuntrombocytopenie uit 6 medische centra in China. We gebruikten drie verschillende assays die de functie en reactiviteit van bloedplaatjes onderzochten. 1) Flowcytometrie: met citraat ontstold volbloed werd verdund in PBS om te resulteren in 20 x 10 ^ 9 / l bloedplaatjes, en 20 μl werd verdeeld in polystyreen reageerbuizen. Tien microliter anti-CD42b-PE werd toegevoegd en gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd. Agonisten (TRAP-6 12,5 μMol/L, Collageen 20 μg/ml, ADP 2 μM, Epinefrine 20 μM, Arachidonzuur 0,275 mM, Ristocetine 1,5 mg/ml) of PBS werden toegevoegd (elk 10 μl) en opnieuw gedurende 10 minuten geïncubeerd . Vervolgens werden mAb PAC-1-FITC of anti-CD62p-FITC (elk 10 μl) of de overeenkomstige isotype-gematchte controles toegevoegd. Na 15 minuten incubatie in het donker werd de reactie gestopt met 500 μl PBS. Monsters werden geanalyseerd op een flowcytometer (FACScan, Becton-Dickinson) door 10.000 gebeurtenissen in de CD42b-positieve fractie te meten. 2) Filopodia-kwantificering: In het kort liet men bloedplaatjes in Tyrode's buffer hechten aan VWF (9x10^6 cellen/dekglaasje) in aanwezigheid van botrocetine (1 μg/ml) en Integrilin (40 μg/ml) bij 37°C . Na 15 minuten werden niet-aanhangende bloedplaatjes verwijderd door wassen en aanhangende bloedplaatjes werden gefixeerd met 4% PFA, gekleurd met TRITC-phalloidin (2 μg / ml) en bekeken met epifluorescentiemicroscopie voor filopodia-telling. 3) Bloedplaatjesaggregatie: Gemeten op een geautomatiseerde bloedplaatjesaggregatieanalysator.

Het begrijpen van het risico op bloedingen en de onderliggende determinanten van bloedingen is belangrijk om patiënten te helpen herkennen die farmacologische therapie nodig hebben, zelfs bij een hoger aantal bloedplaatjes. Eerdere studies hebben gesuggereerd dat een laag aantal bloedplaatjes, een verhoogde leeftijd van de patiënt, het gebruik van gelijktijdige medicatie en mannelijk geslacht geassocieerd zijn met een verhoogd risico op bloedingen. Het huidige onderzoek zal beantwoorden of de bloedplaatjesfunctie de ernst van bloedingen bij volwassen ITP-patiënten voorspelt. Klinische informatie van gerekruteerde deelnemers omvat geslacht, leeftijd, aantal bloedplaatjes en lichamelijk / laboratoriumonderzoek. Verblinding werd ingesteld tussen onderzoekers die bloedingsrisico's evalueerden en degenen die experimenten uitvoerden.