Sammenhengen mellom blodplatereaktivitet og blødningsrisiko ved ITP for voksne

Etterforskerne gjennomfører en prospektiv multisenter dobbeltblind studie av 400 voksne pasienter med immun trombocytopeni fra 6 medisinske sentre i Kina. Vi tok i bruk tre forskjellige analyser som undersøkte blodplatefunksjon og reaktivitet. 1) Flowcytometri: Citrat-antikoagulert fullblod ble fortynnet i PBS for å resultere i 20×10^9/L blodplater, og 20 μl ble delt opp i polystyren-reagensglass. Ti mikroliter anti-CD42b-PE ble tilsatt og inkubert ved romtemperatur i 10 minutter. Agonister (TRAP-6 12,5 μMol/L, Kollagen 20 μg/mL, ADP 2 μM, Epinefrin 20 μM, Arakidonsyre 0,275 mM, Ristocetin 1,5 mg/ml) eller PBS ble tilsatt (10 μl igjen for hver) . Deretter ble mAb PAC-1-FITC eller anti-CD62p-FITC (10 μl hver) eller de tilsvarende isotype-matchede kontrollene tilsatt. Etter 15 minutters inkubering i mørket ble reaksjonen stoppet med 500 μl PBS. Prøver ble analysert på et flowcytometer (FACScan, Becton-Dickinson) ved å måle 10 000 hendelser i den CD42b-positive fraksjonen. 2) Filopodia kvantifisering: Kort fortalt ble blodplater i Tyrodes buffer tillatt å feste seg til VWF (9×10^6 celler/dekkglass) i nærvær av botrocetin (1 μg/mL) og Integrilin (40 μg/mL) ved 37°C . Etter 15 minutter ble ikke-klebende blodplater fjernet ved vask og vedheftende blodplater ble fiksert med 4% PFA, farget med TRITC-falloidin (2 μg/ml) og sett ved epifluorescensmikroskopi for filopodia-telling. 3) Blodplateaggregering: Målt på en automatisert blodplateaggregeringsanalysator.

Å forstå blødningsrisiko og underliggende determinanter for blødning er viktig for å hjelpe til med å gjenkjenne pasienter som vil trenge farmakologisk behandling selv ved høyere blodplatetall. Tidligere studier har antydet at lavt antall blodplater, økt pasientalder, bruk av samtidige medisiner og mannlig kjønn er assosiert med økt blødningsrisiko. Den foreliggende undersøkelsen vil gi svar på om blodplatefunksjon forutsier alvorlighetsgraden av blødning hos voksne ITP-pasienter. Klinisk informasjon om rekrutterte deltakere inkluderer kjønn, alder, antall blodplater og fysisk/laboratorieundersøkelse. Blinding ble satt mellom etterforskere som evaluerte blødningsrisiko og de som utførte eksperimenter.