La asociación entre la reactividad plaquetaria y el riesgo de sangrado en la PTI en adultos

Los investigadores están realizando un estudio multicéntrico prospectivo doble ciego de 400 pacientes adultos con trombocitopenia inmune de 6 centros médicos en China. Adoptamos tres ensayos diferentes que examinaron la función y la reactividad de las plaquetas. 1) Citometría de flujo: la sangre completa anticoagulada con citrato se diluyó en PBS para dar como resultado 20 × 10 ^ 9 /L de plaquetas, y 20 μl se dividieron en alícuotas en tubos de ensayo de poliestireno. Se añadieron diez microlitros de anti-CD42b-PE y se incubaron a temperatura ambiente durante 10 min. Se agregaron agonistas (TRAP-6 12.5 μMol/L, Colágeno 20 μg/mL, ADP 2 μM, Epinefrina 20 μM, Ácido araquidónico 0.275 mM, Ristocetina 1.5 mg/mL) o PBS (10 μl cada uno) y se incubaron nuevamente por 10 min. . Luego se añadieron mAb PAC-1-FITC o anti-CD62p-FITC (10 μl cada uno) o los correspondientes controles de isotipo coincidente. Después de 15 min de incubación en la oscuridad, la reacción se detuvo con 500 μl de PBS. Las muestras se analizaron en un citómetro de flujo (FACScan, Becton-Dickinson) midiendo 10.000 eventos en la fracción positiva para CD42b. 2) Cuantificación de Filopodia: Brevemente, se permitió que las plaquetas en el tampón de Tyrode se adhirieran al VWF (9 × 10 ^ 6 células/cubreobjetos) en presencia de botrocetina (1 μg/mL) e Integrilin (40 μg/mL) a 37 °C . Después de 15 min, las plaquetas no adherentes se eliminaron mediante lavado y las plaquetas adherentes se fijaron con PFA al 4 %, se tiñeron con TRITC-faloidina (2 μg/mL) y se observaron mediante microscopía de epifluorescencia para el recuento de filopodios. 3) Agregación de plaquetas: medida en un analizador automático de agregación de plaquetas.

Comprender el riesgo de sangrado y los determinantes subyacentes del sangrado es importante para ayudar a reconocer a los pacientes que requerirán terapia farmacológica incluso con recuentos de plaquetas más altos. Estudios anteriores han sugerido que los recuentos bajos de plaquetas, la mayor edad del paciente, el uso de medicamentos concurrentes y el sexo masculino se asocian con un mayor riesgo de hemorragia. La presente investigación responderá si la función plaquetaria predice la gravedad del sangrado en pacientes adultos con PTI. La información clínica de los participantes reclutados incluye sexo, edad, recuento de plaquetas y examen físico/de laboratorio. Se estableció el cegamiento entre los investigadores que evaluaron los riesgos de sangrado y los que realizaron los experimentos.