L'associazione tra reattività piastrinica e rischio di sanguinamento nell'ITP adulto

I ricercatori stanno intraprendendo uno studio prospettico multicentrico in doppio cieco su 400 pazienti adulti con trombocitopenia immunitaria da 6 centri medici in Cina. Abbiamo adottato tre diversi test che hanno esaminato la funzione e la reattività delle piastrine. 1) Citometria a flusso: il sangue intero anticoagulato con citrato è stato diluito in PBS per ottenere piastrine 20 × 10 ^ 9 / L e 20 μl sono stati aliquotati in provette di polistirene. Dieci microlitri di anti-CD42b-PE sono stati aggiunti e incubati a temperatura ambiente per 10 minuti. Sono stati aggiunti agonisti (TRAP-6 12,5 μMol/L, collagene 20 μg/mL, ADP 2 μM, epinefrina 20 μM, acido arachidonico 0,275 mM, ristocetina 1,5 mg/mL) o PBS (10 μl ciascuno) e incubati nuovamente per 10 min . Quindi sono stati aggiunti mAb PAC-1-FITC o anti-CD62p-FITC (10 μl ciascuno) o i corrispondenti controlli corrispondenti all'isotipo. Dopo 15 minuti di incubazione al buio, la reazione è stata fermata con 500 μl di PBS. I campioni sono stati analizzati su un citometro a flusso (FACScan, Becton-Dickinson) misurando 10.000 eventi nella frazione CD42b-positiva. 2) Quantificazione della filopodia: in breve, le piastrine nel tampone di Tyrode sono state lasciate aderire al VWF (9 × 10 ^ 6 cellule/vetro di copertura) in presenza di botrocetina (1 μg/mL) e Integrilin (40 μg/mL) a 37°C . Dopo 15 minuti, le piastrine non aderenti sono state rimosse mediante lavaggio e le piastrine aderenti sono state fissate con PFA al 4%, colorate con TRITC-falloidina (2 μg/mL) e visualizzate mediante microscopia a epifluorescenza per il conteggio dei filopodi. 3) Aggregazione piastrinica: misurata su un analizzatore automatico di aggregazione piastrinica.

Comprendere il rischio di sanguinamento e i determinanti sottostanti del sanguinamento è importante per aiutare a riconoscere i pazienti che richiederanno una terapia farmacologica anche con conte piastriniche più elevate. Precedenti studi hanno suggerito che un basso numero di piastrine, l'aumento dell'età del paziente, l'uso concomitante di farmaci e il sesso maschile sono associati a un aumento del rischio di sanguinamento. La presente indagine risponderà se la funzione piastrinica predice la gravità del sanguinamento nei pazienti adulti con ITP. Le informazioni cliniche dei partecipanti reclutati includono sesso, età, conta piastrinica ed esame fisico/di laboratorio. L'accecamento è stato impostato tra i ricercatori che hanno valutato i rischi di sanguinamento e quelli che hanno eseguito gli esperimenti.