Der Zusammenhang zwischen Thrombozytenreaktivität und Blutungsrisiko bei ITP bei Erwachsenen

Die Forscher führen eine prospektive multizentrische Doppelblindstudie mit 400 erwachsenen Patienten mit Immunthrombozytopenie aus 6 medizinischen Zentren in China durch. Wir haben drei verschiedene Assays verwendet, die die Blutplättchenfunktion und -reaktivität untersuchten. 1) Durchflusszytometrie: Mit Citrat antikoaguliertes Vollblut wurde in PBS verdünnt, um 20 × 10 9 /L Blutplättchen zu ergeben, und 20 & mgr; l wurden in Polystyrol-Teströhrchen aliquotiert. Zehn Mikroliter Anti-CD42b-PE wurden zugegeben und 10 min bei Raumtemperatur inkubiert. Agonisten (TRAP-6 12,5 µMol/L, Collagen 20 µg/mL, ADP 2 µM, Epinephrin 20 µM, Arachidonsäure 0,275 mM, Ristocetin 1,5 mg/mL) oder PBS wurden zugegeben (jeweils 10 µl) und erneut 10 min inkubiert . Dann wurden mAb PAC-1-FITC oder Anti-CD62p-FITC (je 10 μl) oder die entsprechenden Isotyp-gematchten Kontrollen zugegeben. Nach 15-minütiger Inkubation im Dunkeln wurde die Reaktion mit 500 μl PBS gestoppt. Die Proben wurden auf einem Durchflusszytometer (FACScan, Becton-Dickinson) analysiert, indem 10.000 Ereignisse in der CD42b-positiven Fraktion gemessen wurden. 2) Quantifizierung von Filopodien: Kurz gesagt, Blutplättchen in Tyrode-Puffer wurden in Gegenwart von Botrocetin (1 μg/ml) und Integrilin (40 μg/ml) bei 37 °C an VWF (9 × 10 6 Zellen/Deckglas) haften gelassen . Nach 15 min wurden nicht anhaftende Blutplättchen durch Waschen entfernt und anhaftende Blutplättchen wurden mit 4 % PFA fixiert, mit TRITC-Phalloidin (2 &mgr;g/ml) gefärbt und durch Epifluoreszenzmikroskopie auf Filopodienzählung untersucht. 3) Blutplättchenaggregation: Gemessen auf einem automatisierten Blutplättchenaggregationsanalysator.

Das Verständnis des Blutungsrisikos und der zugrunde liegenden Determinanten von Blutungen ist wichtig, um Patienten zu erkennen, die selbst bei höheren Thrombozytenzahlen eine pharmakologische Therapie benötigen. Frühere Studien haben gezeigt, dass niedrige Thrombozytenzahlen, erhöhtes Patientenalter, gleichzeitige Einnahme von Medikamenten und männliches Geschlecht mit einem erhöhten Blutungsrisiko verbunden sind. Die vorliegende Untersuchung wird beantworten, ob die Thrombozytenfunktion die Schwere der Blutung bei erwachsenen ITP-Patienten vorhersagt. Zu den klinischen Informationen der rekrutierten Teilnehmer gehören Geschlecht, Alter, Thrombozytenzahl und körperliche Untersuchung/Laboruntersuchung. Die Verblindung wurde zwischen den Ermittlern, die Blutungsrisiken bewerteten, und denjenigen, die Experimente durchführten, festgelegt.