Utvärdering av eosinofil fenotyp hos KOL-patienter (V-FEO)

Hos cirka 30 % av KOL-patienterna finns ett ökat antal cirkulerande eosinofiler. På sitt membran uttrycker eosinofiler flera molekyler, också relaterade till deras fysiologi, nämligen major histocompatibility complex (MHC) klass II, som behövs för antigenpresentation; CCR3, receptor för en mängd olika kemokiner, inklusive eotaxin (CCL11), eotaxin-3 (CCL26), monocytkemotaktisk protein (MCP)-3 (CCL7), MCP-4 (CCL13) och RANTES (CCL5); kluster av differentiering (CD)125, som binder IL-5 och stimulerar eosinofilproliferation; CD63, en markör som är uppreglerad efter degranulering av eosinofiler; och CD294 (CRTH2) som är prostaglandin D2-receptorn och är associerad med allergi och inflammation. Hypotesen för föreliggande studie är att olika kliniska fenotyper av KOL-patienter kan associeras med olika aktiveringsstatusar av eosinofiler, som kan utvärderas genom att analysera genom flödescytometri membranuttrycket av de ovan nämnda molekylerna. I synnerhet antar utredarna att membranmolekyler kan moduleras i olika stadier av sjukdomarna och kan förändras efter medicinska och rehabiliterande terapier.

Utredarna kommer att analysera fenotypen av eosinofiler från blodprover från patienter med KOL, inlagda på sjukhus efter en episod av exacerbation, eller för rutinkontroller. På detta sätt kommer sambandet mellan ett särskilt mönster av molekyler uttryckta på eosinofilers membran och svårighetsgraden av KOL att definieras. Dessutom, för inlagda patienter, kommer eosinofilers fenotyp även på utskrivningsdagen att analyseras. På detta sätt kommer effekten av terapier på eosinofilers aktivering att bedömas. Patienternas kliniska status kommer att bedömas med standardtester såsom St George Respiratory Questionnaire (SGRQ), BODE-index, COPD Assessment Test (CAT), Six min. Gåtest (6'WT), lungfunktionstester (PFT).

Eosinofilers fenotyp och in vitro cytokinproduktion kommer att analyseras med flerfärgsflödescytometri. För att minimera effekten av manipulation kommer färgning av membranmolekyler att utföras på helblodsprover, följt av lysering av erytrocyter. Följande molekyler kommer att analyseras: CD45, CD16, CD15, CD63, CCR3, CD125, CD294, Siglec-8. Efter in vitro-stimulering med lipopolysackarid (LPS) eller CCL11 kommer produktionen av interleukin (IL)-4, TGFbeta och IL-2 att analyseras.