Avaliação do Fenótipo Eosinófilo em Pacientes com DPOC (V-FEO)

Em cerca de 30% dos pacientes com DPOC há um número aumentado de eosinófilos circulantes. Os eosinófilos expressam na sua membrana várias moléculas, também relacionadas com a sua fisiologia, nomeadamente o complexo principal de histocompatibilidade (MHC) de classe II, necessário para a apresentação de antigénios; CCR3, receptor para uma variedade de quimiocinas, incluindo eotaxina (CCL11), eotaxina-3 (CCL26), proteína quimiotática de monócitos (MCP)-3 (CCL7), MCP-4 (CCL13) e RANTES (CCL5); cluster de diferenciação (CD)125, que se liga a IL-5 e estimula a proliferação de eosinófilos; CD63, um marcador que é regulado positivamente após a degranulação dos eosinófilos; e CD294 (CRTH2) que é o receptor da prostaglandina D2, e está associado a alergia e inflamação. A hipótese para o presente estudo é que diferentes fenótipos clínicos de pacientes com DPOC poderiam estar associados a diferentes estados de ativação de eosinófilos, que podem ser avaliados analisando por citometria de fluxo a expressão de membrana das moléculas acima mencionadas. Em particular, os pesquisadores levantam a hipótese de que as moléculas de membrana podem ser moduladas em diferentes estágios das doenças e podem mudar após terapias médicas e de reabilitação.

Os investigadores irão analisar o fenótipo dos eosinófilos a partir de amostras de sangue de doentes com DPOC, admitidos no hospital após um episódio de exacerbação, ou para controlos de rotina. Dessa forma, será definida a associação entre um determinado padrão de moléculas expressas na membrana dos eosinófilos e a gravidade da DPOC. Além disso, para pacientes hospitalizados, o fenótipo dos eosinófilos também será analisado no dia da alta. Desta forma será avaliado o efeito das terapias na ativação dos eosinófilos. O estado clínico dos pacientes será avaliado por testes padrão, como St George Respiratory Questionnaire (SGRQ), índice BODE, COPD Assessment Test (CAT), Six min. Teste de Caminhada (6'WT), Testes de Função Pulmonar (PFT).

O fenótipo dos eosinófilos e a produção in vitro de citocinas serão analisados ​​por citometria de fluxo multicolor. Para minimizar o efeito da manipulação, será realizada coloração de moléculas de membrana em amostras de sangue total, seguida de lise de eritrócitos. Serão analisadas as seguintes moléculas: CD45, CD16, CD15, CD63, CCR3, CD125, CD294, Siglec-8. Após estimulação in vitro com lipopolissacarídeo (LPS) ou CCL11, será analisada a produção de interleucina (IL)-4, TGFbeta e IL-2.