Eosinofiilien fenotyypin arviointi COPD-potilailla (V-FEO)

Noin 30 %:lla keuhkoahtaumatautipotilaista verenkierrossa olevien eosinofiilien määrä on lisääntynyt. Eosinofiilit ilmentävät kalvollaan useita molekyylejä, jotka liittyvät myös niiden fysiologiaan, nimittäin MHC-luokkaan II, jota tarvitaan antigeenin esittämiseen; CCR3, useiden kemokiinien reseptori, mukaan lukien eotaksiini (CCL11), eotaksiini-3 (CCL26), monosyyttien kemotaktinen proteiini (MCP)-3 (CCL7), MCP-4 (CCL13) ja RANTES (CCL5); erilaistumisklusteri (CD)125, joka sitoo IL-5:tä ja stimuloi eosinofiilien lisääntymistä; CD63, markkeri, joka lisääntyy eosinofiilien degranulaation jälkeen; ja CD294 (CRTH2), joka on prostaglandiini D2 -reseptori, ja joka liittyy allergiaan ja tulehdukseen. Tämän tutkimuksen hypoteesi on, että keuhkoahtaumatautipotilaiden erilaiset kliiniset fenotyypit voivat liittyä eosinofiilien erilaisiin aktivaatiotiloihin, joita voidaan arvioida analysoimalla virtaussytometrisesti edellä mainittujen molekyylien kalvoekspressiota. Erityisesti tutkijat olettavat, että kalvomolekyylejä voidaan moduloida sairauksien eri vaiheissa ja ne voivat muuttua lääketieteellisten ja kuntouttavien hoitojen jälkeen.

Tutkijat analysoivat eosinofiilien fenotyyppiä keuhkoahtaumatautia sairastavien potilaiden verinäytteistä, jotka on otettu sairaalaan pahenemisjakson jälkeen tai rutiinikontrollia varten. Tällä tavalla määritetään yhteys eosinofiilien kalvolla ilmentyneiden molekyylien tietyn mallin ja COPD:n vakavuuden välillä. Lisäksi sairaalapotilailla analysoidaan eosinofiilien fenotyyppiä myös kotiutuspäivänä. Tällä tavalla hoitojen vaikutusta eosinofiilien aktivaatioon arvioidaan. Potilaiden kliininen tila arvioidaan standarditesteillä, kuten St George Respiratory Questionnaire (SGRQ), BODE-indeksi, COPD Assessment Test (CAT), Six min. Kävelytesti (6'WT), keuhkotoimintatestit (PFT).

Eosinofiilien fenotyyppi ja in vitro -sytokiinituotanto analysoidaan monivärivirtaussytometrialla. Manipuloinnin vaikutuksen minimoimiseksi kalvomolekyylit värjätään kokoverinäytteillä, minkä jälkeen erytrosyyttejä hajotetaan. Seuraavat molekyylit analysoidaan: CD45, CD16, CD15, CD63, CCR3, CD125, CD294, Siglec-8. In vitro -stimulaation jälkeen lipopolysakkaridilla (LPS) tai CCL11:llä interleukiini (IL)-4:n, TGFbeta:n ja IL-2:n tuotanto analysoidaan.