Valutazione del fenotipo eosinofilo nei pazienti con BPCO (V-FEO)

In circa il 30% dei pazienti con BPCO vi è un aumento del numero di eosinofili circolanti. Sulla loro membrana, gli eosinofili esprimono diverse molecole, anche legate alla loro fisiologia, vale a dire il complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) di classe II, necessario per la presentazione dell'antigene; CCR3, recettore per una varietà di chemochine, tra cui eotassina (CCL11), eotassina-3 (CCL26), proteina chemotattica dei monociti (MCP)-3 (CCL7), MCP-4 (CCL13) e RANTES (CCL5); cluster di differenziazione (CD) 125, che lega IL-5 e stimola la proliferazione degli eosinofili; CD63, un marcatore sovraregolato dopo la degranulazione degli eosinofili; e CD294 (CRTH2) che è il recettore delle prostaglandine D2, ed è associato ad allergia e infiammazione. L'ipotesi per il presente studio è che diversi fenotipi clinici di pazienti affetti da BPCO possano essere associati a diversi stati di attivazione degli eosinofili, che possono essere valutati analizzando mediante citometria a flusso l'espressione di membrana delle suddette molecole. In particolare, i ricercatori ipotizzano che le molecole di membrana possano essere modulate in diversi stadi delle malattie e possano cambiare dopo terapie mediche e riabilitative.

Gli investigatori analizzeranno il fenotipo degli eosinofili da campioni di sangue di pazienti con BPCO, ricoverati in ospedale dopo un episodio di esacerbazione o per controlli di routine. In questo modo verrà definita l'associazione tra un particolare pattern di molecole espresse sulla membrana degli eosinofili e la gravità della BPCO. Inoltre, per i pazienti ospedalizzati, verrà analizzato il fenotipo degli eosinofili anche il giorno della dimissione. In questo modo sarà valutato l'effetto delle terapie sull'attivazione degli eosinofili. Lo stato clinico dei pazienti sarà valutato mediante test standard come St George Respiratory Questionnaire (SGRQ), BODE index, COPD Assessment Test (CAT), Six min. Test del cammino (6'WT), test di funzionalità polmonare (PFT).

Il fenotipo degli eosinofili e la produzione di citochine in vitro saranno analizzati mediante citometria a flusso multicolore. Per ridurre al minimo l'effetto della manipolazione, verrà eseguita la colorazione delle molecole di membrana su campioni di sangue intero, seguita dalla lisi degli eritrociti. Saranno analizzate le seguenti molecole: CD45, CD16, CD15, CD63, CCR3, CD125, CD294, Siglec-8. Dopo stimolazione in vitro con lipopolisaccaride (LPS) o CCL11, verrà analizzata la produzione di interleuchina (IL)-4, TGFbeta e IL-2.