Оценка фенотипа эозинофилов у больных ХОБЛ (V-FEO)

Примерно у 30% больных ХОБЛ отмечается повышенное количество циркулирующих эозинофилов. На своей мембране эозинофилы экспрессируют несколько молекул, также связанных с их физиологией, а именно главный комплекс гистосовместимости (MHC) класса II, необходимый для презентации антигена; CCR3, рецептор различных хемокинов, включая эотаксин (CCL11), эотаксин-3 (CCL26), хемотаксический белок моноцитов (MCP)-3 (CCL7), MCP-4 (CCL13) и RANTES (CCL5); кластер дифференцировки (CD)125, который связывает IL-5 и стимулирует пролиферацию эозинофилов; CD63, маркер, который активируется после дегрануляции эозинофилов; и CD294 (CRTH2), который представляет собой рецептор простагландина D2 и связан с аллергией и воспалением. Гипотеза настоящего исследования заключается в том, что различные клинические фенотипы пациентов с ХОБЛ могут быть связаны с различными статусами активации эозинофилов, которые можно оценить, анализируя с помощью проточной цитометрии мембранную экспрессию вышеупомянутых молекул. В частности, исследователи предполагают, что мембранные молекулы могут модулироваться на разных стадиях заболеваний, а также изменяться после медикаментозного и реабилитационного лечения.

Исследователи будут анализировать фенотип эозинофилов из образцов крови пациентов с ХОБЛ, поступивших в больницу после эпизода обострения или для рутинного контроля. Таким образом, будет определена связь между определенным набором молекул, экспрессируемых на мембране эозинофилов, и тяжестью ХОБЛ. Кроме того, для госпитализированных пациентов будет проанализирован фенотип эозинофилов также в день выписки. Таким образом будет оцениваться влияние терапии на активацию эозинофилов. Клиническое состояние пациентов будет оцениваться с помощью стандартных тестов, таких как респираторный опросник Святого Георгия (SGRQ), индекс BODE, оценочный тест на ХОБЛ (CAT), шесть мин. Тест ходьбы (6'WT), тесты функции легких (PFT).

Фенотип эозинофилов и продукцию цитокинов in vitro будут анализировать с помощью многоцветной проточной цитометрии. Чтобы свести к минимуму эффект манипуляции, окрашивание мембранных молекул будет проводиться на образцах цельной крови с последующим лизисом эритроцитов. Будут проанализированы следующие молекулы: CD45, CD16, CD15, CD63, CCR3, CD125, CD294, Siglec-8. После стимуляции in vitro липополисахаридом (LPS) или CCL11 будет проанализирована продукция интерлейкина (IL)-4, TGFbeta и IL-2.