Evaluación del fenotipo de eosinófilos en pacientes con EPOC (V-FEO)

En alrededor del 30% de los pacientes con EPOC hay un aumento en el número de eosinófilos circulantes. En su membrana, los eosinófilos expresan varias moléculas, también relacionadas con su fisiología, a saber, el complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) clase II, necesario para la presentación del antígeno; CCR3, receptor para una variedad de quimiocinas, que incluyen eotaxina (CCL11), eotaxina-3 (CCL26), proteína quimiotáctica de monocitos (MCP)-3 (CCL7), MCP-4 (CCL13) y RANTES (CCL5); grupo de diferenciación (CD) 125, que se une a IL-5 y estimula la proliferación de eosinófilos; CD63, un marcador que aumenta después de la desgranulación de los eosinófilos; y CD294 (CRTH2) que es el receptor de prostaglandina D2, y está asociado a alergia e inflamación . La hipótesis del presente ensayo es que diferentes fenotipos clínicos de pacientes con EPOC podrían estar asociados a diferentes estados de activación de los eosinófilos, que pueden ser evaluados analizando por citometría de flujo la expresión en membrana de dichas moléculas. En particular, los investigadores plantean la hipótesis de que las moléculas de membrana pueden modularse en diferentes etapas de las enfermedades y pueden cambiar después de las terapias médicas y de rehabilitación.

Los investigadores analizarán el fenotipo de eosinófilos a partir de muestras de sangre de pacientes con EPOC, ingresados ​​en el hospital tras un episodio de exacerbación, o para controles de rutina. De esta forma, se definirá la asociación entre un patrón particular de moléculas expresadas en la membrana de los eosinófilos y la gravedad de la EPOC. Además, para los pacientes hospitalizados, se analizará el fenotipo de eosinófilos también el día del alta. De esta forma se evaluará el efecto de las terapias sobre la activación de los eosinófilos. El estado clínico de los pacientes se evaluará mediante pruebas estándar como el Cuestionario Respiratorio de St George (SGRQ), el índice BODE, la Prueba de Evaluación de la EPOC (CAT), Six min. Prueba de Caminata (6'WT), Pruebas de Función Pulmonar (PFT).

El fenotipo de los eosinófilos y la producción de citocinas in vitro se analizarán mediante citometría de flujo multicolor. Para minimizar el efecto de la manipulación, la tinción de las moléculas de membrana se realizará en muestras de sangre completa, seguida de la lisis de los eritrocitos. Se analizarán las siguientes moléculas: CD45, CD16, CD15, CD63, CCR3, CD125, CD294, Siglec-8. Tras la estimulación in vitro con lipopolisacárido (LPS) o CCL11, se analizará la producción de interleucina (IL)-4, TGFbeta e IL-2.