Den nya LC-MS/MS-metoden för bestämning av obunden takrolimus i plasma (FreeTAC)

Eftersom det finns över 15 000 patienter i Polen som behandlas med kontinuerlig takrolimus (TAC), är identifiering och validering av mer känsliga och specifika biomarkörer av yttersta vikt. Utredarna föreslår en flerstegsbedömning av TAC terapeutisk läkemedelsövervakning (TDM) hos njur- och levermottagare. En roll för genetisk profilering för läkemedelskoncentration och kliniska effekter kommer också att tas upp. Projektet kommer avsevärt att bidra till att förstå takrolimus farmakokinetik och kroppens respons på läkemedelsexponering. Dessutom är det föreslagna projektet det första försöket att integrera både olika TDM-mätmetoder och patientgenetik i en rigorös, prospektiv studie med bedömning av de kliniska över- och underexponeringseffekterna av TAC. Det förväntas ge ett argument för implementering av ännu mer personlig, förutsägbar immunsuppressiv terapi.

Utredarna antar att:

1. Det finns en korrelation mellan fri TAC-nivå med läkemedelstoxicitet å ena sidan, och transplantatavstötning och underimmunsuppression trots målkoncentration i helblod å den andra.
2. CYP3A5-uttryckare och icke-uttryckare kommer att uppvisa olika nivåer av TAC i både helblods C0 och fri TAC C0 samt olika effektivitets- och toxicitetsprofiler.
3. Koncentrationen av fri TAC är relaterad till förändringar i koncentrationen av blodkomponenter, så det är möjligt att härleda ekvationen för att beräkna fri TAC-koncentration som ett användbart verktyg för justering av läkemedelsdosen

Studera design

Mål:

Fas 1) Ett primärt syfte med denna studie är att utveckla och validera en ny metod för mätning av obunden takrolimus. - Publicerad: 12 mars 2022 (https://doi.org/10.3390/pharmaceutics14030632)

Fas 2) Ett primärt mål är att beräkna fri fraktion av TAC från hematokritnivå, albuminkoncentration och rutinmässig helblods-TAC C0 för att förutsäga dosjustering mer exakt. Den genererade ekvationen kommer att plottas mot CYP3A-polymorfismer.

Fas 3) Ett primärt mål är att leta efter en korrelation mellan obunden TAC-nivå i ett ultrafiltrat med transplantatavstötningsepisoder.

Sekundära slutpunkter:

En komplex jämförelse av olika metoder för bestämning av TAC-koncentration i helblod, plasma och ultrafiltrat planeras.

Fördelarna med genotypning före administrering av TAC för dosförutsägelse kommer att utvärderas.

De studerade grupperna:

1. 40 på varandra följande njur- eller levertransplanterade mottagare på TAC-baserad immunsuppression.
2. 300 njurtransplanterade mottagare på den lokala polikliniken.
3. 40 njurtransplanterade mottagare som upplever akut avstötning av njurtransplantatet.

TAC-mätningar:

Mätningar av obundna takrolimuskoncentrationer i plasmaultrafiltrat och takrolimuskoncentrationer i plasma och helblod kommer att utföras med ett Nexera LC-system med LCMS-8050 MS trippelkvadrupol med askomycin och deutererad takrolimus som interna standarder.

Genotypning:

DNA från patienter kommer att renas och analyseras med RT-PCR för CYP3A4- och CYP3A5-polymorfismer. Studiens varaktighet: Studien är planerad till 3 år: 2,5 år för provtagning, 0,5 år för analys och publicering av resultaten.

Effektvariabler: Standardövervakning av blod- och urinlaboratorieparametrar, dalnivå för TAC i helblod (C0), plasma-TAC-koncentration, fri TAC-koncentration i plasmaultrafiltrat, TAC dagliga doser.