El nuevo método LC-MS/MS para la determinación de tacrolimus libre en plasma (FreeTAC)

Dado que hay más de 15 000 pacientes en Polonia en terapia continua con tacrolimus (TAC), la identificación y validación de biomarcadores más sensibles y específicos es de suma importancia. Los investigadores proponen una evaluación de varios pasos del control de fármacos terapéuticos (TDM, por sus siglas en inglés) del TAC en receptores de riñón e hígado. También se abordará el papel del perfil genético en la concentración del fármaco y los efectos clínicos. El proyecto contribuirá significativamente a comprender la farmacocinética y la respuesta del organismo a la exposición al fármaco. Además, el proyecto propuesto es el primer intento de integrar los diferentes métodos de medición de TDM y la genética del paciente en un estudio prospectivo riguroso con la evaluación de los efectos TAC clínicos de sobreexposición y subexposición. Se espera que proporcione un argumento para la implementación de una terapia inmunosupresora aún más personalizada y predecible.

Los investigadores plantean la hipótesis de que:

1. Existe una correlación entre el nivel de TAC libre y la toxicidad del fármaco, por un lado, y el rechazo del injerto y la inmunosupresión insuficiente a pesar de la concentración objetivo en sangre total, por el otro.
2. Los que expresan y no expresan CYP3A5 presentarán diferentes niveles de TAC tanto en sangre total C0 como en TAC C0 libre, así como diferentes perfiles de efectividad y toxicidad.
3. La concentración de TAC libre está relacionada con los cambios en la concentración de los componentes de la sangre, por lo que es posible derivar la ecuación para calcular la concentración de TAC libre como una herramienta útil para el ajuste de la dosis del fármaco.

Diseño del estudio

Objetivos:

Fase 1) Un objetivo principal de este estudio es desarrollar y validar un nuevo método para la medición de tacrolimus libre. - Publicado: 12 de marzo de 2022 (https://doi.org/10.3390/pharmaceutics14030632)

Fase 2) Un objetivo principal es calcular la fracción libre de TAC a partir del nivel de hematocrito, la concentración de albúmina y el TAC C0 de sangre total de rutina para predecir el ajuste de la dosis con mayor precisión. La ecuación generada se representará frente a los polimorfismos de CYP3A.

Fase 3) Un objetivo principal es buscar una correlación entre el nivel de TAC libre en un ultrafiltrado con episodios de rechazo del injerto.

Puntos finales secundarios:

Está prevista una comparación compleja de diferentes métodos de determinación de la concentración de TAC en sangre total, plasma y ultrafiltrado.

Se evaluará el beneficio del genotipado antes de la administración de TAC para la predicción de dosis.

Los grupos estudiados:

1. 40 receptores consecutivos de trasplante de riñón o hígado en inmunosupresión basada en TAC.
2. 300 receptores de trasplante de riñón que asisten a la consulta externa local.
3. 40 receptores de trasplante renal que experimentan rechazo agudo del aloinjerto renal.

Medidas TAC:

Las mediciones de las concentraciones de tacrolimus libre en ultrafiltrado de plasma y las concentraciones de tacrolimus en plasma y sangre total se realizarán utilizando un sistema Nexera LC con LCMS-8050 MS triple cuadrupolo con ascomicina y tacrolimus deuterado como patrones internos.

Genotipado:

El ADN de los pacientes se purificará y analizará mediante RT-PCR para polimorfismos CYP3A4 y CYP3A5 Duración del estudio: El estudio está programado para 3 años: 2,5 años para la recolección de muestras, 0,5 años para el análisis y publicación de los resultados.

Variables de eficacia: Monitoreo estándar de parámetros de laboratorio en sangre y orina, nivel mínimo de TAC en sangre total (C0), concentración de TAC en plasma, concentración de TAC libre en ultrafiltrado de plasma, dosis diarias de TAC.