Il nuovo metodo LC-MS/MS per la determinazione del tacrolimus non legato nel plasma (FreeTAC)

Poiché in Polonia vi sono oltre 15.000 pazienti in terapia continua con tacrolimus (TAC), l'identificazione e la convalida di biomarcatori più sensibili e specifici è della massima importanza. I ricercatori propongono una valutazione in più fasi del monitoraggio terapeutico del farmaco TAC (TDM) nei riceventi di reni e fegato. Verrà affrontato anche il ruolo della profilazione genetica sulla concentrazione dei farmaci e sugli effetti clinici. Il progetto contribuirà in modo significativo alla comprensione della farmacocinetica del tacrolimus e della risposta dell'organismo all'esposizione al farmaco. Inoltre, il progetto proposto è il primo tentativo di integrare entrambi i diversi metodi di misurazione del TDM e la genetica del paziente in uno studio prospettico rigoroso con la valutazione degli effetti clinici della sovra e sottoesposizione del TAC. Si prevede che fornisca un argomento per l'implementazione di una terapia immunosoppressiva ancora più personalizzata e prevedibile.

Gli inquirenti ipotizzano che:

1. Esiste una correlazione tra il livello di TAC libera e la tossicità del farmaco da un lato e il rigetto del trapianto e la sottoimmunosoppressione nonostante la concentrazione target nel sangue intero dall'altro.
2. Gli espressi e i non espressi del CYP3A5 presenteranno diversi livelli di TAC sia nel sangue intero C0 che nel TAC C0 libero, nonché diversi profili di efficacia e tossicità.
3. La concentrazione di TAC libera è correlata ai cambiamenti nella concentrazione dei componenti del sangue, quindi è possibile derivare l'equazione per il calcolo della concentrazione di TAC libera come strumento utile per l'aggiustamento del dosaggio del farmaco

Progettazione dello studio

Obiettivi:

Fase 1) Un obiettivo primario di questo studio è sviluppare e convalidare un nuovo metodo per la misurazione del tacrolimus non legato. - Pubblicato: 12 marzo 2022 (https://doi.org/10.3390/pharmaceutics14030632)

Fase 2) Un obiettivo primario è calcolare la frazione libera di TAC dal livello di ematocrito, la concentrazione di albumina e la TAC C0 del sangue intero di routine per prevedere l'aggiustamento della dose in modo più accurato. L'equazione generata sarà tracciata rispetto ai polimorfismi del CYP3A.

Fase 3) Un obiettivo primario è cercare una correlazione tra il livello di TAC non legato in un ultrafiltrato con episodi di rigetto del trapianto.

Endpoint secondari:

È previsto un confronto complesso di diversi metodi di determinazione della concentrazione di TAC nel sangue intero, nel plasma e nell'ultrafiltrato.

Verrà valutato il vantaggio della genotipizzazione prima della somministrazione di TAC per la previsione della dose.

I gruppi studiati:

1. 40 destinatari consecutivi di trapianto di rene o fegato sottoposti a immunosoppressione basata su TAC.
2. 300 trapiantati di rene che frequentano l'ambulatorio locale.
3. 40 riceventi di trapianto di rene con rigetto acuto dell'allotrapianto renale.

Misure TAC:

Le misurazioni delle concentrazioni di tacrolimus non legato nell'ultrafiltrato plasmatico e delle concentrazioni di tacrolimus nel plasma e nel sangue intero saranno eseguite utilizzando un sistema Nexera LC con triplo quadrupolo LCMS-8050 MS con ascomicina e tacrolimus deuterato come standard interni.

Genotipizzazione:

Il DNA dei pazienti sarà purificato e analizzato mediante RT-PCR per polimorfismi CYP3A4 e CYP3A5 Durata dello studio: Lo studio è previsto per 3 anni: 2,5 anni per la raccolta dei campioni, 0,5 anni per l'analisi e la pubblicazione dei risultati.

Variabili di efficacia: monitoraggio standard dei parametri di laboratorio del sangue e delle urine, livello minimo di TAC nel sangue intero (C0), concentrazione di TAC nel plasma, concentrazione di TAC libera nell'ultrafiltrato plasmatico, dosi giornaliere di TAC.