O Novo Método LC-MS/MS para Determinação de Tacrolimus Não Ligado no Plasma (FreeTAC)

Como existem mais de 15.000 pacientes na Polônia em terapia contínua com tacrolimus (TAC), a identificação e validação de biomarcadores mais sensíveis e específicos é de extrema importância. Os pesquisadores propõem uma avaliação em várias etapas do monitoramento de drogas terapêuticas TAC (TDM) em receptores de rim e fígado. Também será abordado o papel do perfil genético na concentração de drogas e efeitos clínicos. O projeto contribuirá significativamente para a compreensão da farmacocinética do tacrolimus e da resposta do corpo à exposição ao medicamento. Além disso, o projeto proposto é a primeira tentativa de integrar diferentes métodos de medição de TDM e genética do paciente em um estudo prospectivo rigoroso com a avaliação dos efeitos TAC de super e subexposição clínica. Espera-se que forneça um argumento para a implementação de uma terapia imunossupressora ainda mais personalizada e previsível.

Os investigadores levantam a hipótese de que:

1. Existe uma correlação do nível de TAC livre com a toxicidade da droga, por um lado, e rejeição do enxerto e subimunossupressão, apesar da concentração alvo no sangue total, por outro.
2. Expressores e não expressores de CYP3A5 apresentarão diferentes níveis de TAC tanto no sangue total C0 quanto no TAC C0 livre, bem como diferentes perfis de eficácia e toxicidade.
3. A concentração de TAC livre está relacionada a mudanças na concentração de componentes do sangue, assim é possível derivar a equação para calcular a concentração de TAC livre como uma ferramenta útil para o ajuste da dosagem de drogas

Design de estudo

Objetivos.

Fase 1) O objetivo principal deste estudo é desenvolver e validar um novo método para medição de tacrolimus não ligado. - Publicado: 12 de março de 2022 (https://doi.org/10.3390/pharmaceutics14030632)

Fase 2) Um objetivo primário é calcular a fração livre de TAC a partir do nível de hematócrito, concentração de albumina e sangue total de rotina TAC C0 para prever o ajuste de dose com mais precisão. A equação gerada será plotada contra os polimorfismos CYP3A.

Fase 3) Um objetivo primário é procurar uma correlação entre o nível de TAC não ligado em um ultrafiltrado com episódios de rejeição do enxerto.

Pontos de extremidade secundários:

Está prevista uma comparação complexa de diferentes métodos de determinação da concentração de TAC em sangue total, plasma e ultrafiltrado.

O benefício da genotipagem antes da administração de TAC para predição de dose será avaliado.

Os grupos estudados:

1. 40 receptores consecutivos de transplante de rim ou fígado em imunossupressão baseada em TAC.
2. 300 receptores de transplante renal atendidos no ambulatório local.
3. 40 receptores de transplante renal com rejeição aguda do aloenxerto renal.

Medições TAC:

As medições das concentrações de tacrolimus não ligado no ultrafiltrado plasmático e as concentrações de tacrolimus no plasma e no sangue total serão realizadas usando um sistema Nexera LC com LCMS-8050 MS quadrupolo triplo com ascomicina e tacrolimus deuterado como padrões internos.

Genotipagem:

O DNA dos pacientes será purificado e analisado por RT-PCR para polimorfismos CYP3A4 e CYP3A5 Duração do estudo: O estudo está previsto para 3 anos: 2,5 anos para coleta de amostras, 0,5 ano para análise e publicação dos resultados.

Variáveis ​​de eficácia: Monitorização padrão dos parâmetros laboratoriais de sangue e urina, nível mínimo de TAC no sangue total (C0), concentração de TAC no plasma, concentração de TAC livre no ultrafiltrado plasmático, doses diárias de TAC.