Uusi LC-MS/MS-menetelmä sitoutumattoman takrolimuusin määrittämiseksi plasmassa (FreeTAC)

Koska Puolassa yli 15 000 potilasta saa jatkuvaa takrolimuusihoitoa (TAC), herkempien ja spesifisempien biomarkkerien tunnistaminen ja validointi on äärimmäisen tärkeää. Tutkijat ehdottavat TAC-terapeuttisten lääkkeiden seurannan (TDM) monivaiheista arviointia munuaisten ja maksan vastaanottajilla. Myös geneettisen profiloinnin roolia lääkepitoisuudessa ja kliinisissä vaikutuksissa käsitellään. Hanke auttaa merkittävästi ymmärtämään takrolimuusin farmakokinetiikkaa ja kehon vastetta lääkealtistukseen. Lisäksi ehdotettu projekti on ensimmäinen yritys integroida sekä erilaisia ​​TDM-mittausmenetelmiä että potilasgenetiikkaa tiukkaan, prospektiiviseen tutkimukseen, jossa arvioidaan kliinisen yli- ja alialtistuksen TAC-vaikutuksia. Sen odotetaan tarjoavan argumentin entistä henkilökohtaisemman, ennustettavamman immunosuppressiivisen hoidon toteuttamiselle.

Tutkijat olettavat, että:

1. Vapaa TAC-taso korreloi toisaalta lääkkeen toksisuuden kanssa ja toisaalta siirteen hylkiminen ja immunosuppressio, vaikka kokoveren tavoitepitoisuudet ovatkin.
2. CYP3A5:n ekspressoijat ja ei-ekspressorit esittävät erilaisia ​​TAC-tasoja sekä kokoveren CO:ssa että vapaassa TAC-CO:ssa sekä erilaisia ​​tehokkuus- ja toksisuusprofiileja.
3. Vapaan TAC:n pitoisuus liittyy veren komponenttien pitoisuuksien muutoksiin, joten on mahdollista johtaa vapaan TAC:n pitoisuuden laskentayhtälö hyödylliseksi työkaluksi lääkeannostuksen säätämiseen.

Opintojen suunnittelu

Tavoitteet:

Vaihe 1) Tämän tutkimuksen ensisijaisena tavoitteena on kehittää ja validoida uusi menetelmä sitoutumattoman takrolimuusin mittaamiseksi. - Julkaistu: 12. maaliskuuta 2022 (https://doi.org/10.3390/pharmaceutics14030632)

Vaihe 2) Ensisijainen tavoite on laskea TAC:n vapaa osuus hematokriittitasosta, albumiinipitoisuudesta ja rutiininomaisesta kokoveren TAC C0:sta annoksen säätämisen ennustamiseksi tarkemmin. Luotu yhtälö piirretään CYP3A-polymorfismeja vastaan.

Vaihe 3) Ensisijainen tavoite on etsiä korrelaatiota sitoutumattoman TAC-tason välillä ultrasuodoksen ja siirteen hylkimisjaksojen välillä.

Toissijaiset päätepisteet:

Kokoveren, plasman ja ultrasuodoksen TAC-pitoisuuden määritysmenetelmien monimutkainen vertailu on suunniteltu.

Genotyypityksen hyöty ennen TAC:n antamista annoksen ennustamiseen arvioidaan.

Tutkitut ryhmät:

1. 40 peräkkäistä munuais- tai maksasiirteen saajaa TAC-pohjaisella immunosuppressiolla.
2. 300 munuaisensiirtopotilasta paikallisella poliklinikalla.
3. 40 munuaissiirteen saajaa koki munuaisallograftin akuutin hylkimisen.

TAC-mittaukset:

Sitoutumattoman takrolimuusipitoisuudet plasman ultrafiltraatissa ja takrolimuusipitoisuudet plasmassa ja kokoveressä mitataan käyttämällä Nexera LC -järjestelmää, jossa on LCMS-8050 MS kolminkertainen kvadrupoli ja askomysiini ja deuteroitu takrolimuusi sisäisinä standardeina.

Genotyypitys:

Potilaiden DNA puhdistetaan ja analysoidaan RT-PCR:llä CYP3A4- ja CYP3A5-polymorfismien varalta. Tutkimuksen kesto: Tutkimuksen kesto on 3 vuotta: 2,5 vuotta näytteiden keräämiseen, 0,5 vuotta analyysiin ja tulosten julkaisemiseen.

Tehokkuusmuuttujat: Veren ja virtsan laboratorioparametrien standardiseuranta, kokoveren TAC-matalin taso (C0), plasman TAC-pitoisuus, plasman ultrasuodoksen vapaa TAC-pitoisuus, TAC-vuorokausiannokset.