Nowa metoda LC-MS/MS do oznaczania niezwiązanego takrolimusu w osoczu (FreeTAC)

Ponieważ w Polsce jest ponad 15 000 pacjentów na ciągłej terapii takrolimusem (TAC), identyfikacja i walidacja bardziej czułych i swoistych biomarkerów ma ogromne znaczenie. Badacze proponują wieloetapową ocenę TAC terapeutycznego monitorowania leków (TDM) u biorców nerek i wątroby. Zostanie również omówiona rola profilowania genetycznego w stężeniu leku i efektach klinicznych. Projekt znacząco przyczyni się do zrozumienia farmakokinetyki takrolimusu i reakcji organizmu na ekspozycję na lek. Co więcej, proponowany projekt jest pierwszą próbą zintegrowania różnych metod pomiaru TDM i genetyki pacjentów w rygorystycznym, prospektywnym badaniu z oceną klinicznych skutków prześwietlenia i niedoświetlenia TAC. Oczekuje się, że będzie to argument za wdrożeniem jeszcze bardziej spersonalizowanej, przewidywalnej terapii immunosupresyjnej.

Śledczy stawiają hipotezę, że:

1. Istnieje korelacja poziomu wolnego TAC z toksycznością leku z jednej strony, a odrzuceniem przeszczepu i niedoborem odporności pomimo docelowego stężenia w pełnej krwi z drugiej.
2. Osoby wyrażające i niewyrażające CYP3A5 będą prezentować różne poziomy TAC zarówno w C0 pełnej krwi, jak iw wolnym TAC C0, jak również różne profile skuteczności i toksyczności.
3. Stężenie wolnego TAC jest związane ze zmianami stężenia składników krwi, stąd możliwe jest wyprowadzenie równania do obliczania stężenia wolnego TAC jako użytecznego narzędzia do dostosowania dawki leku

Projekt badania

Cele:

Faza 1) Głównym celem tego badania jest opracowanie i walidacja nowej metody pomiaru niezwiązanego takrolimusu. - Opublikowano: 12 marca 2022 r. (https://doi.org/10.3390/pharmaceutics14030632)

Faza 2) Głównym celem jest obliczenie wolnej frakcji TAC na podstawie poziomu hematokrytu, stężenia albumin i rutynowego TAC C0 krwi pełnej w celu dokładniejszego przewidzenia dostosowania dawki. Wygenerowane równanie zostanie wykreślone w funkcji polimorfizmów CYP3A.

Faza 3) Głównym celem jest poszukiwanie korelacji między poziomem niezwiązanego TAC w ultrafiltracie a epizodami odrzucania przeszczepu.

Drugorzędowe punkty końcowe:

Planowane jest kompleksowe porównanie różnych metod oznaczania stężenia TAC w krwi pełnej, osoczu i ultrafiltracie.

Oceniona zostanie korzyść z genotypowania przed podaniem TAC w celu przewidywania dawki.

Badane grupy:

1. 40 kolejnych biorców przeszczepu nerki lub wątroby poddanych immunosupresji opartej na TAC.
2. 300 biorców przeszczepu nerki przebywa w miejscowej przychodni.
3. 40 biorców przeszczepu nerki doświadcza ostrego odrzucenia alloprzeszczepu nerki.

pomiary TAC:

Pomiary stężeń niezwiązanego takrolimusu w ultrafiltracie osocza oraz stężeń takrolimusu w osoczu i krwi pełnej zostaną przeprowadzone przy użyciu systemu Nexera LC z potrójnym kwadrupolem LCMS-8050 MS z askomycyną i deuterowanym takrolimusem jako standardami wewnętrznymi.

Genotypowanie:

DNA pacjentów zostanie oczyszczone i przeanalizowane metodą RT-PCR pod kątem polimorfizmów CYP3A4 i CYP3A5 Czas trwania badania: Badanie zaplanowano na 3 lata: 2,5 roku na pobranie próbek, 0,5 roku na analizę i publikację wyników.

Zmienne skuteczności: standardowe monitorowanie parametrów laboratoryjnych krwi i moczu, minimalny poziom TAC we krwi pełnej (C0), stężenie TAC w osoczu, stężenie wolnego TAC w ultrafiltracie osocza, dzienne dawki TAC.