Utveckling av aktuella örtformuleringar för behandling av kutan leishmaniasis

STUDIEPROTOKOLL

1.1. Inledning Leishmaniasis är ett stort försummat hälsoproblem som ofta förekommer i tropiska och subtropiska regioner med en prevalens på 1,5 miljoner per år globalt. Sjukdomen orsakas av protozoparasit från släktet Leishmania. Överföring skedde av sandfluga av släktet Phlebotomus i (gamla världen) och Lutzomyia (nya världen). Kutan leishmaniasis är begränsad till hud och cirka 185 miljoner människor i riskzonen i 61 länder. Nu är det endemiskt i Pakistan (olika regioner) och diffunderar snabbt, särskilt i flyktinglägren är den främsta orsaken L. major följt av L. tropica. Vaksam litteraturgenomgång avslöjade att förutom de fyra provinserna i Pakistan hittades ökade förekomster av CL i Balochistan som är den största provinsen (i yta) följt av NWFP. I Sindh-provinsen (Dadu, Jacobabad, Larkana och Karachi) rapporteras vanligtvis för fall medan det i Punjab (Multan och Dera Ghazi Khan) huvudsakligen rapporteras för förekomst av sjukdom. Diagnos av denna sjukdom görs genom klinisk bild vanligtvis torra lesioner orsakas av L. tropica medan fuktiga och tidiga ulcerösa lesioner orsakas av L. major, sådana lesioner tar månader till år för att läka till slut läker av egna men satellitlesioner och bakterier och svampar. infektioner resulterar i försenad och komplicerad läkningsprocess, men i icke-endemiska områden är det svårt att diagnostisera på grund av oklar form, tillsammans med dessa sekundära infektioner kan försenad behandling samt felbehandling ibland också orsaka förändringar i den kliniska bilden. I sådana situationer är undersökning av utstryk från lesion det diagnostiska verktyget tillsammans med odling och histopatologiska undersökningar.

1.2. Kliniska prövningar mot CL Metanoliskt barkextrakt av Casuarina equisetifolia L. visade god antileishmanial potential mot L.major genom att använda in vitro-analys som styrde oss mot ett innovativt terapeutiskt koncept för utveckling av nya växtbaserade formuleringar mot leishmaniasis genom accelererade sårtillslutningar i kliniska prövningar på mänskliga tävlande . Ulcerös CL beror på bristfällig sårläkning beroende på denna hypotes aktuell studie planeras för att undersöka den kliniska effekten av det nya protokollet Gyburene 5% kräm som anti-parasitmedel följt av Thuscare 5% salva för att påskynda stängning av sår. Det primära syftet med denna studie är att utvärdera anti leishmanialt resultat av Gyburene 5 % kräm vid sårtillslutning och efter sex månader, medan det sekundära målet är att utvärdera att oupphörlig sårvård tillsammans med antiparasitmedel kan resultera i en värdefull förbättring av behandlingen.

1.3. Provpopulation och studiedesign: Detta är en enkelblind, randomiserad studie. Sjuttio patienter med bekräftad kutan leishmaniasis rekryterades i studien. Deltagarna fördelades slumpmässigt i två grupper. Pilotgrupp (fick ingen medicin tidigare) och resistent grupp (som redan fått medicin antingen förälder eller topikal). Under försöken avbröts 20 deltagare på grund av bristande uppföljning, speciellt de drabbade människorna från landsbygden.

1.3.1. Etiskt övervägande: Forskningsprotokollet godkändes av den etiska kommittén vid styrelsen för avancerade studier och forskningsuniversitetet i Karachi Vide Resol nr 16. Blanketter för informerat samtycke togs från varje patient.

1.3.2. Patientbedömning:

Anamnes för varje patient (ålder, kön, komorbiditeter, sårtillstånd, lesionsställe och storlek med Giemsa-utstrykstestrapport) togs före behandlingsprotokollet på klinisk Performa speciellt utformad för denna studie och bestod av två delar, först för personalinformation och tvåa för medicinsk historia. Lesionsstorleken beräknades med hjälp av Vernier-skjutmått i två dimensioner och varje deltagare rekommenderades för veckouppföljning till slutet av behandlingen, porträttbilder togs före, under och efter behandlingen med digitalkamera för bedömning av läkningsprocenten. Uppföljning av botade patienter gjordes i ytterligare sex månader för att säkerställa att inget bakslag har inträffat. Närvaro eller frånvaro av parasit bekräftades genom utstrykstest medan den läkta arean beräknades som procentandel av läkning med följande formel (Baie och Sheikh, 2000):

1.3.2.1. Inklusionskriterier

1. Patienter som uppfyllde de histologiska kriterierna för förekomst av parasit
2. Ålder äldre än 4 år och båda könen.
3. Lesioner är mindre än 5 till antalet hos varje patient
4. Storleken på lesionen är mindre än 5 cm2
5. Deltagare som hade avbrutit behandlingen mer än 4 veckor tidigare och lesionerna förbättrades inte.
6. Sjukdomens varaktighet för patienter under försök var sex månader (akut) och mer än ett år (kronisk).

1.3.2.2. Exklusions kriterier

1. Patienter som hade tagit några immunsuppressiva läkemedel eller anti leishmaniala läkemedel under förra månaden.
2. Gravida kvinnor och ammande mödrar.
3. Tävlande med komplikationer av njur-, lever- och lungsjukdomar, immunförsvagade patienter såsom (HIV).
4. Patienter som lider av tillstånd som malaria, tuberkulos och behandlingsregimer pågår för sådana infektioner.

1.3.3. Studiebehandling Innan behandlingsprotokollet inleddes gjordes även toxikologisk utvärdering av örtextrakt för att säkerställa säkerheten hos aktuella farmaceutiska växtbaserade preparat. I fall av mer än en lesion, var och en av dem som var inriktad på biopsier, även om alla fick samma behandling. Båda patientgrupperna behandlades med topikala örtformuleringar Gyburene 5 % kräm (för botande av CL) morgon och kväll och Thuscare 5 % salva (för snabb sårläkning och bot av superinfektioner) endast på natten i två olika riktningar i vinkeln 90º till varandra genom att lämna skadan avslöjad.

Före applicering av den andra formuleringen rekommenderades alla tävlande att tvätta lesionen med normal koksaltlösning. Veckovis uppföljning gjordes tills behandlingen avslutats för att säkerställa hela boten, såsom för negativa hudtest av amastigoter i Giemsa-stammen och fullständig läkning med återepitelisering av lesionen. Varje formulering dispenserades i 10 g behållare (separat) tillräckligt för en vecka.

1.4. Statistisk analys T-test används för jämförelse av läkningshastighet mellan två grupper medan Kaplan Meier testar mellan pilot och resistent grupp medan Kaplan Meier test används för att beräkna läkt area per vecka för både resistent grupp och pilotgrupp vid P<0,05 med SPSS version 21.

Klinisk utvärdering Performa för kutan Leishmaniasis (CL) Personlig information Patientkod: ------------------- Man/Kvinna: ------------- ---------- Ålder: ---------- Adress: --------------- Yrke: ---------- ---------- Civilstånd: -------------

Kontaktnummer: -------------------------- CNIC-nr: ------------------ ------Familjehistoria:

Klinisk information Morfologi av lesionen

• Ulcererad
• Skorpa
• Plack
• Tillstånd av knölskador
• Torr
• Wet Giemsa Smear test
• Positiv
• Negativ Duration av lesioner
• ≥ 6 månader
• Mellan 6-12 månader
• ≤ 6 månader Antal lesioner
• 1
• 2
• 3
• 4
• 5

Hälsotillstånd

• Artrit
• Allergi
• Diabetes
• Immunstörning
• Blodtryck Differentialdiagnos för CL
• Bakteriell och svampinfektion i huden
• Eksem
• Syfilis
• Sarcoidos
• Blastomykos
• Övrigt Area av lesion/besök Besök I: Area=………………cm2 Besök II: Area= …………..cm2 Besök III: Area=…………. cm2 Besök IV: Area=………… cm2 Besök V: Area=…………. cm2

Hudläkarens kommentarer:

Hudläkares signatur