Desenvolvimento de formulações fitoterápicas tópicas para o tratamento da leishmaniose cutânea

PROTOCOLO DE ESTUDO

1.1. Introdução A leishmaniose é um importante problema de saúde negligenciado frequentemente encontrado em regiões tropicais e subtropicais com taxa de prevalência de 1,5 milhão por ano em todo o mundo. A doença é causada por parasita protozoário do gênero Leishmania. A transmissão ocorreu por flebotomíneos do gênero Phlebotomus no (Velho Mundo) e Lutzomyia (Novo Mundo). A leishmaniose cutânea é restrita à pele e cerca de 185 milhões de pessoas em risco em 61 países. Agora é endêmica no Paquistão (diferentes regiões) e se difunde rapidamente, particularmente nos campos de refugiados. O principal agente causador encontrado é L. major seguido por L. tropica. A revisão vigilante da literatura revelou que, além das quatro províncias do Paquistão, foram encontradas incidências aumentadas de CL no Baluchistão, que é a maior província (em área), seguida por NWFP. Na província de Sindh (Dadu, Jacobabad, Larkana e Karachi) são comumente relatados casos, enquanto em Punjab (Multan e Dera Ghazi Khan) são relatados principalmente pela ocorrência da doença. O diagnóstico desta doença é feito pelo quadro clínico geralmente lesões secas são causadas por L. tropica enquanto lesões úmidas e ulcerativas precoces são causadas por L. major, tais lesões levam meses a anos para cicatrizar eventualmente cicatrizam por conta própria, mas lesões satélites e bactérias e fungos As infecções resultam em um processo de cicatrização demorado e complicado, mas em áreas não endêmicas é difícil diagnosticar devido à forma pouco clara, juntamente com essas infecções secundárias, o atraso no tratamento, bem como os maus-tratos às vezes também podem causar alterações no quadro clínico. Em tais situações, o exame do esfregaço da lesão é a ferramenta diagnóstica, juntamente com a cultura e os exames histopatológicos.

1.2. Ensaios clínicos contra CL O extrato metanólico da casca de Casuarina equisetifolia L. mostrou bom potencial antileishmania contra L.major usando análise in vitro que nos direcionou para um conceito terapêutico inovador para o desenvolvimento de novas formulações fitoterápicas contra a leishmaniose através do fechamento acelerado de feridas em ensaios clínicos em competidores humanos . A LC ulcerosa ocorre devido à cicatrização defeituosa da ferida, dependendo desta hipótese, o estudo atual está planejado para explorar a eficácia clínica do novo protocolo Gyburene 5% creme como agente antiparasitário seguido por Thuscare 5% pomada para acelerar o fechamento de feridas. O objetivo primário deste estudo é avaliar o resultado anti-leishmania do creme Gyburene 5% no fechamento da ferida e após seis meses, enquanto o objetivo secundário é avaliar que o cuidado incessante da ferida junto com o agente antiparasitário pode resultar em uma melhoria valiosa no tratamento.

1.3. População amostral e desenho do estudo: Este é um estudo randomizado simples-cego. Setenta pacientes com leishmaniose cutânea confirmada foram recrutados para o estudo. Os participantes foram alocados aleatoriamente em dois grupos. Grupo piloto (não recebeu nenhuma medicação antes) e grupo resistente (que já recebeu medicação parenteral ou tópica). Durante os testes, 20 participantes foram descartados como resultado da falta de acompanhamento, especialmente as pessoas afetadas provenientes de áreas rurais.

1.3.1. Consideração ética: O protocolo de pesquisa foi aprovado pelo comitê de ética do Conselho de Estudos Avançados e Pesquisa da Universidade de Karachi Vide Resol No. 16. Formulários de consentimento informado foram retirados de cada paciente.

1.3.2. Avaliação do paciente:

O histórico médico de cada paciente (idade, sexo, comorbidades, condição da ferida, local e tamanho da lesão com relatório do teste de esfregaço de Giemsa) foi obtido antes do protocolo de tratamento no Performa clínico especialmente projetado para este estudo e consistia em duas partes, primeiro para informações pessoais e o segundo para o histórico médico. O tamanho da lesão foi calculado usando o paquímetro Vernier em duas dimensões e cada participante foi aconselhado a fazer acompanhamento semanal até o final da terapia, fotos de retrato foram tiradas antes, durante e após a terapia usando câmera digital para avaliação da porcentagem de cicatrização. O acompanhamento dos pacientes curados foi feito por mais seis meses para garantir que nenhum retrocesso tenha ocorrido. A presença ou ausência do parasita foi confirmada pelo teste de esfregaço enquanto a área cicatrizada foi calculada pela porcentagem de cicatrização pela seguinte fórmula (Baie e Sheikh, 2000):

1.3.2.1. Critério de inclusão

1. Pacientes que preencheram os critérios histológicos para presença do parasita
2. Idade superior a 4 anos e ambos os sexos.
3. As lesões são menos de 5 em número em cada paciente
4. O tamanho da lesão é inferior a 5 cm2
5. Participantes que pararam a terapia há mais de 4 semanas e as lesões não estavam melhorando.
6. A duração da doença para os pacientes em estudo foi de seis meses (aguda) e mais de um ano (crônica).

1.3.2.2. Critério de exclusão

1. Pacientes que tomaram algum medicamento imunossupressor ou antileishmania no último mês.
2. Gestantes e lactantes.
3. Concorrentes com complicações de doença renal, hepática e pulmonar, pacientes imunocomprometidos como (HIV).
4. Pacientes que sofrem de doenças como malária, tuberculose e regime de tratamento para essas infecções.

1.3.3. Tratamento do estudo Antes do início do protocolo de tratamento, a avaliação toxicológica dos extratos de ervas também foi realizada para garantir a segurança das preparações farmacêuticas de ervas tópicas. No caso de mais de uma lesão, qualquer uma foi encaminhada para biópsia, embora todas tenham recebido o mesmo tratamento. Ambos os grupos de pacientes foram tratados com formulações fitoterápicas tópicas Gyburene 5% creme (para cura de LC) de manhã e à noite e Thencare 5% pomada (para rápida cicatrização de feridas e cura de superinfecções) apenas à noite em duas direções diferentes no ângulo de 90º entre si deixando a lesão descoberta.

Antes da aplicação da segunda formulação, todos os competidores foram aconselhados a lavar a lesão com solução salina normal. O acompanhamento semanal foi feito até o final da terapia, a fim de garantir a cura total, como baciloscopia negativa de amastigotas na cepa Giemsa e cicatrização completa com reepitelização da lesão. Cada formulação foi dispensada em recipiente de 10 g (separadamente) suficiente para uma semana.

1.4. Análise estatística T-test usado para comparar a taxa de cicatrização entre dois grupos, enquanto o teste de Kaplan Meier entre o grupo piloto e o grupo resistente, enquanto o teste Kaplan Meier usado para calcular a área cicatrizada por semana para os grupos resistente e piloto em P<0,05 usando SPSS versão 21.

Avaliação clínica Performa para Leishmaniose Cutânea (LC) Informações pessoais Código do paciente: ------------------- Masculino/Feminino: ------------- --------- Idade: ---------- Endereço: --------------- Profissão: ---------- --------- Estado civil: -------------

Nº de contato: -------------------------- Nº CNIC: ------------------ ------História de família:

Informações clínicas Morfologia da lesão

• Ulcerado
• crosta
• Placa
• Condição de lesão de nódulo
• Seco
• Teste de esfregaço de Giemsa úmido
• Positivo
• Duração negativa das lesões
• ≥ 6 meses
• Entre 6-12 meses
• ≤ 6 meses Nº de lesões
• 1
• 2
• 3
• 4
• 5

Condição de saúde

• Artrite
• Alergia
• Diabetes
• Distúrbio imunológico
• Pressão arterial Diagnóstico diferencial para CL
• Infecção bacteriana e fúngica da pele
• Eczema
• Sífilis
• Sarcoidose
• blastomicose
• Outros Área da lesão/consulta Visita I: Área=……………cm2 Visita II: Área= …………..cm2 Visita III: Área=…………. cm2 Visita IV: Área=………… cm2 Visita V: Área=…………. cm2

Observações do Dermatologista:

Assinatura do Dermatologista