Vývoj topických bylinných přípravků pro léčbu kožní leishmaniózy

PROTOKOL STUDIA

1.1. Úvod Leishmanióza je hlavní opomíjený zdravotní problém, který se často vyskytuje v tropických a subtropických oblastech s celosvětovou prevalencí 1,5 milionu ročně. Onemocnění způsobuje prvokový parazit z rodu Leishmania. K přenosu došlo písečnými muškami rodu Phlebotomus ve (Starý svět) a Lutzomyia (Nový svět). Kožní leishmanióza je omezena na kůži a v 61 zemích je ohroženo přibližně 185 milionů lidí. Nyní je endemický v Pákistánu (různé oblasti) a rychle se šíří, zejména v uprchlických táborech hlavním zjištěným původcem je L. major následovaný L. tropica. Bdělý přehled literatury odhalil, že kromě čtyř pákistánských provincií byl zvýšený výskyt CL zjištěn v Balúčistánu, což je největší provincie (v oblasti), po níž následuje NWFP. V provincii Sindh (Dadu, Jacobabad, Larkana a Karáčí) jsou běžně hlášeny případy, zatímco v Paňdžábu (Multan a Dera Ghazi Khan) jsou hlášeny hlavně výskyty onemocnění. Diagnostika těchto onemocnění se provádí klinickým obrazem, obvykle suché léze jsou způsobeny L. tropica, zatímco vlhké a časné ulcerózní léze jsou způsobeny L. major, takové léze se hojí měsíce až roky, případně se zahojí vlastními, ale satelitními lézemi a bakteriálními a plísňovými infekce má za následek opožděný a komplikovaný proces hojení, ale v neendemických oblastech je pro nejasnou formu obtížně diagnostikovatelná, spolu s touto sekundární infekcí může oddálení léčby i nesprávná léčba někdy způsobit i změny klinického obrazu. V takových situacích je diagnostickým nástrojem vyšetření stěru z léze spolu s kultivačním a histopatologickým vyšetřením.

1.2. Klinické studie proti CL Metanolický extrakt z kůry Casuarina equisetifolia L. prokázaly dobrý antileishmaniální potenciál proti L.major pomocí in vitro analýzy, která nás nasměrovala k inovativnímu terapeutickému konceptu pro vývoj nových bylinných přípravků proti leishmanióze prostřednictvím zrychleného uzavírání ran v klinických studiích na lidských soutěžících . Ulcerózní CL je z důvodu vadného hojení ran v závislosti na této hypotéze plánována současná studie prozkoumat klinickou účinnost nového protokolu Gyburene 5% krém jako antiparazitární prostředek následovaný 5% mastí Thencare pro urychlení uzavření ran. Primárním cílem této studie je vyhodnotit účinek Gyburene 5% krému proti leishmanii při uzavření rány a po šesti měsících, zatímco sekundárním cílem je vyhodnotit, že nepřetržitá péče o rány spolu s antiparazitárním prostředkem může vést k cennému zlepšení léčby.

1.3. Vzorová populace a design studie: Toto je jednoduše zaslepená, randomizovaná studie. Do studie bylo zařazeno sedmdesát pacientů s potvrzenou kožní leishmaniózou. Účastníci byli náhodně rozděleni do dvou skupin. Pilotní skupina (předtím nedostávala žádné léky) a rezistentní skupina (kteří již dostávali léky buď parenterální nebo topické). Během zkoušek bylo vyřazeno 20 účastníků v důsledku nedostatečného sledování, zejména postižených lidí pocházejících z venkovských oblastí.

1.3.1. Etické zvážení: Výzkumný protokol byl schválen etickou komisí Rady pokročilých studií a výzkumné univerzity v Karáčí Vide Resol č. 16. Od každého pacienta byly odebrány formuláře informovaného souhlasu.

1.3.2. Hodnocení pacienta:

Lékařská anamnéza každého pacienta (věk, pohlaví, přidružená onemocnění, stav rány, místo a velikost léze se zprávou o testu Giemsa stěru) byla odebrána před léčebným protokolem na klinické Performě speciálně navržené pro tuto studii a sestávala ze dvou částí, první pro personální informace a druhý pro anamnézu. Velikost léze byla vypočtena pomocí posuvného měřítka Vernier ve dvou rozměrech a každému účastníkovi bylo doporučeno týdenní sledování až do konce terapie, portrétní fotografie byly pořízeny před, v průběhu a po terapii pomocí digitálního fotoaparátu pro posouzení procenta hojení. Sledování vyléčených pacientů bylo prováděno po dobu dalších šesti měsíců, aby se zajistilo, že nenastal žádný pokles. Přítomnost nebo nepřítomnost parazita byla potvrzena testem stěru, zatímco zhojená plocha byla vypočtena jako procento hojení podle následujícího vzorce (Baie a Sheikh, 2000):

1.3.2.1. Kritéria pro zařazení

1. Pacienti, kteří splnili histologická kritéria pro přítomnost parazita
2. Věk starší 4 let a obě pohlaví.
3. Počet lézí je u každého pacienta menší než 5
4. Velikost léze je menší než 5 cm2
5. Účastníci, kteří ukončili léčbu před více než 4 týdny a léze se nezlepšovaly.
6. Trvání onemocnění u pacientů ve studii bylo šest měsíců (akutní) a více než jeden rok (chronické).

1.3.2.2. Kritéria vyloučení

1. Pacienti, kteří v minulém měsíci užívali jakékoli imunosupresivní léky nebo léky proti leishmanii.
2. Těhotné ženy a kojící matky.
3. Soutěžící s komplikacemi ledvin, jater a plic, pacienti s oslabenou imunitou, jako je (HIV).
4. Pacienti trpící onemocněními, jako je malárie, tuberkulóza a léčebný režim pro takové infekce probíhá.

1.3.3. Studovaná léčba Před zahájením léčebného protokolu bylo také provedeno toxikologické hodnocení bylinných extraktů, aby byla zajištěna bezpečnost topických rostlinných farmaceutických přípravků. V případě více než jedné léze kterákoli z nich zaměřená na biopsie, ačkoli všechny byly léčeny stejnou léčbou. Obě skupiny pacientů byly léčeny lokálními bylinnými přípravky Gyburene 5% krém (pro léčbu CL) ráno a večer a Thencare 5% mastí (pro rychlé hojení ran a vyléčení superinfekcí) pouze na noc ve dvou různých směrech pod úhlem 90° vůči sobě tak, že léze zůstane odkrytá.

Před aplikací druhé formulace bylo všem soutěžícím doporučeno opláchnout léze normálním fyziologickým roztokem. Týdenní sledování bylo prováděno až do ukončení terapie, aby bylo zajištěno úplné vyléčení, jako u negativních kožních testů amastigotů u kmene Giemsa a úplné zhojení s reepitelizací léze. Každá formulace byla dávkována v 10g nádobě (odděleně) po dobu jednoho týdne.

1.4. Statistická analýza T-test používaný pro srovnání rychlosti hojení mezi dvěma skupinami, zatímco Kaplan Meierův test mezi pilotní a rezistentní skupinou, zatímco Kaplan Meierův test používá k výpočtu zhojené plochy za týden pro rezistentní i pilotní skupinu při P<0,05 pomocí SPSS verze 21.

Klinické hodnocení Performa pro kožní leishmaniózu (CL) Osobní údaje Kód pacienta: ------------------- Muž/Žena: ------------- --------- Věk: ---------- Adresa: ---------------- Povolání: ----------- --------- Stav: -------------

Kontaktní číslo: -------------------------- Číslo CNIC: ------------------ ------Rodinná historie:

Klinické informace Morfologie léze

• Ulcerovaný
• Kůra
• Plaketa
• Stav léze uzlu
• Schnout
• Wet Giemsa Smear test
• Pozitivní
• Negativní Trvání lézí
• ≥ 6 měsíců
• Mezi 6-12 měsíci
• ≤ 6 měsíců Počet lézí
• 1
• 2
• 3
• 4
• 5

Zdravotní stav

• Artritida
• Alergie
• Diabetes
• Porucha imunity
• Krevní tlak Diferenciální diagnostika pro CL
• Bakteriální a plísňová infekce kůže
• Ekzém
• Syfilis
• Sarkoidóza
• Blastomykóza
• Ostatní Oblast léze/návštěva Návštěva I: Plocha=……………cm2 Návštěva II: Plocha= …………..cm2 Návštěva III: Plocha=…………. cm2 Návštěva IV: Plocha=………… cm2 Návštěva V: Plocha=…………. cm2

Komentář dermatologa:

Podpis dermatologa