Sviluppo di formulazioni erboristiche topiche per il trattamento della leishmaniosi cutanea

PROTOCOLLO DI STUDIO

1.1. Introduzione La leishmaniosi è un grave problema di salute trascurato che si riscontra frequentemente nelle regioni tropicali e subtropicali con un tasso di prevalenza di 1,5 milioni all'anno a livello globale. La malattia è causata da un parassita protozoico del genere Leishmania. La trasmissione è avvenuta tramite flebotomi del genere Phlebotomus nel (Vecchio Mondo) e Lutzomyia (Nuovo Mondo). La leishmaniosi cutanea è limitata alla pelle e circa 185 milioni di persone sono a rischio in 61 paesi. Ora è endemica in Pakistan (diverse regioni) e si diffonde rapidamente, in particolare nei campi profughi, il principale agente eziologico trovato è L. major seguito da L. tropica. Un'attenta revisione della letteratura ha rivelato che, oltre alle quattro province del Pakistan, è stata riscontrata una maggiore incidenza di CL nel Balochistan, che è la provincia più grande (per area) seguita dalla NWFP. Nella provincia del Sindh (Dadu, Jacobabad, Larkana e Karachi) sono comunemente segnalati per i casi mentre nel Punjab (Multan e Dera Ghazi Khan) sono segnalati principalmente per l'insorgenza della malattia. La diagnosi di questa malattia viene effettuata in base al quadro clinico di solito le lesioni secche sono causate da L. tropica mentre le lesioni umide e ulcerative precoci sono causate da L. major, tali lesioni impiegano mesi o anni per la guarigione alla fine guariscono da sole ma lesioni satelliti e batteri e funghi le infezioni provocano un processo di guarigione ritardato e complicato, ma nelle aree non endemiche è difficile da diagnosticare a causa della forma poco chiara, insieme a queste infezioni secondarie, il trattamento ritardato e il maltrattamento a volte possono anche causare cambiamenti nel quadro clinico. In tali situazioni l'esame dello striscio della lesione è lo strumento diagnostico insieme agli esami colturali e istopatologici.

1.2. Gli studi clinici contro CL L'estratto di corteccia metanolica di Casuarina equisetifolia L. ha mostrato un buon potenziale antileishmanioso contro L.major utilizzando l'analisi in vitro che ci ha indirizzato verso un concetto terapeutico innovativo per lo sviluppo di nuove formulazioni a base di erbe contro la leishmaniosi attraverso la chiusura accelerata delle ferite negli studi clinici su concorrenti umani . La CL ulcerosa è dovuta a una cicatrizzazione difettosa della ferita, a seconda di questa ipotesi, è previsto uno studio in corso per esplorare l'efficacia clinica del nuovo protocollo Gyburene 5% crema come agente antiparassitario seguito da unguento Thuscare 5% per accelerare la chiusura delle ferite. L'obiettivo principale di questo studio è valutare l'esito anti leishmania della crema Gyburene 5% alla chiusura della ferita e dopo sei mesi, mentre l'obiettivo secondario è valutare che la cura incessante della ferita insieme all'agente antiparassitario può portare a un prezioso miglioramento nel trattamento.

1.3. Popolazione campione e disegno dello studio: si tratta di uno studio randomizzato in singolo cieco. Settanta pazienti con leishmaniosi cutanea confermata sono stati reclutati nello studio. I partecipanti sono stati assegnati in modo casuale in due gruppi. Gruppo pilota (non ha ricevuto alcun farmaco prima) e gruppo resistente (che ha già ricevuto farmaci parentali o topici). Durante le prove 20 partecipanti sono stati abbandonati a causa della mancanza di follow-up, in particolare le persone colpite provenienti dalle zone rurali.

1.3.1. Considerazione etica: il protocollo di ricerca è stato approvato dal comitato etico del Board of Advanced Studies and Research University of Karachi Vide Resol No. 16. I moduli di consenso informato sono stati prelevati da ciascun paziente.

1.3.2. Valutazione del paziente:

L'anamnesi di ciascun paziente (età, sesso, comorbilità, condizioni della ferita, sede e dimensioni della lesione con referto del test di striscio di Giemsa) è stata raccolta prima del protocollo di trattamento su Performa clinico appositamente progettato per questo studio e consisteva di due parti, prima per informazioni sul personale e secondo per la storia medica. La dimensione della lesione è stata calcolata utilizzando il calibro a corsoio in due dimensioni e ogni partecipante ha consigliato un follow-up settimanale fino alla fine della terapia, prima, durante e dopo la terapia è stata scattata una fotografia di ritratto utilizzando una fotocamera digitale per la valutazione della percentuale di guarigione. Il follow-up dei pazienti guariti è stato effettuato per altri sei mesi per garantire che non si siano verificati problemi. La presenza o l'assenza del parassita è stata confermata dallo striscio mentre l'area guarita è stata calcolata in percentuale di guarigione mediante la seguente formula (Baie e Sheikh, 2000):

1.3.2.1. Criterio di inclusione

1. Pazienti che soddisfacevano i criteri istologici per la presenza del parassita
2. Età superiore a 4 anni ed entrambi i sessi.
3. Le lesioni sono meno di 5 in numero in ciascun paziente
4. La dimensione della lesione è inferiore a 5 cm2
5. Partecipanti che avevano interrotto la terapia più di 4 settimane prima e le lesioni non stavano migliorando.
6. La durata della malattia per i pazienti in prova era di sei mesi (acuta) e più di un anno (cronica).

1.3.2.2. Criteri di esclusione

1. Pazienti che nell'ultimo mese avevano assunto farmaci immunosoppressivi o farmaci anti leishmaniosi.
2. Donne incinte e madri che allattano.
3. Concorrenti con complicanze di malattie renali, epatiche e polmonari, Pazienti immunocompromessi come (HIV).
4. I pazienti che soffrono di condizioni come la malaria, la tubercolosi e il regime di trattamento sono in corso per tali infezioni.

1.3.3. Trattamento in studio Prima dell'inizio del protocollo di trattamento, è stata effettuata anche una valutazione tossicologica degli estratti di erbe per garantire la sicurezza delle preparazioni farmaceutiche a base di erbe per uso topico. In caso di più di una lesione, ognuna destinata a biopsie, sebbene tutte abbiano ricevuto lo stesso trattamento. Entrambi i gruppi di pazienti sono stati trattati con formulazioni erboristiche topiche Gyburene 5% crema (per la cura della CL) al mattino e alla sera e unguento Thuscare al 5% (per una rapida guarigione delle ferite e cura delle super infezioni) solo di notte in due diverse direzioni all'angolo di 90º tra loro lasciando scoperta la lesione.

Prima dell'applicazione della seconda formulazione, a tutti i concorrenti è stato consigliato di lavare la lesione con normale soluzione fisiologica. Il follow-up settimanale è stato effettuato fino al completamento della terapia al fine di garantire l'intera guarigione, ad esempio per gli amastigoti con test cutaneo negativo nel ceppo Giemsa e la completa guarigione con la riepitelizzazione della lesione. Ogni formulazione è stata dispensata in un contenitore da 10 g (separatamente) sufficiente per una settimana.

1.4. Il test T di analisi statistica è stato utilizzato per confrontare il tasso di guarigione tra due gruppi mentre il test Kaplan Meier tra il gruppo pilota e quello resistente mentre il test Kaplan Meier è stato utilizzato per calcolare l'area guarita a settimana sia per il gruppo resistente che per il gruppo pilota a P <0,05 utilizzando SPSS versione 21.

Valutazione clinica Performa per Leishmaniosi Cutanea (CL) Informazioni personali Codice paziente: ------------------- Maschio/Femmina: ------------- --------- Età: ---------- Indirizzo: --------------- Occupazione: ---------- --------- Stato civile: -------------

N. contatto: -------------------------- N. CNIC: ------------------ ------Storia famigliare:

Informazioni cliniche Morfologia della lesione

• Ulcerato
• Crosta
• Placca
• Condizione di lesione del nodulo
• Asciutto
• Wet Giemsa Smear test
• Positivo
• Negativo Durata delle lesioni
• ≥ 6 mesi
• Tra 6-12 mesi
• ≤ 6 mesi Numero di lesioni
• 1
• 2
• 3
• 4
• 5

Condizione di salute

• Artrite
• Allergia
• Diabete
• Disturbo immunitario
• Pressione arteriosa Diagnosi differenziale per CL
• Infezione batterica e fungina della pelle
• Eczema
• Sifilide
• Sarcoidosi
• Blastomicosi
• Altro Area della lesione/visita Visita I: Area=……………cm2 Visita II: Area= …………..cm2 Visita III: Area=…………. cm2 Visita IV: Area=………… cm2 Visita V: Area=…………. cm2

Osservazioni del dermatologo:

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